1dna重組技術(shù)的基本工具(王凱輝)(參考版)
2025-01-10 02:04本頁面
【正文】 三、基因進入受體細胞的載體 —— “分子運輸車” 說明沒有危害，大腸桿菌是非致病菌，且分裂快，也便于從大量復制個體中分離出來 。 ? 質(zhì)粒： 裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、 獨立于細菌 擬核 DNA之外，并具有 自我復制 能力的很小的雙鏈 環(huán)狀 DNA分子。 載體 DNA分子大小應適合 —— 以便提取和在體外進行操作，太大就不便操作。 能自我復制 —— 并能帶著插入的目的基因一起復制 有遺傳標記基因 —— 供重組 DNA的鑒定和選擇。coliDNA連接酶 T4DNA連接酶 來源 功能 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復 磷酸 二酯鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和平末端 (效率較低 ) 相同點 差別 二、 DNA連接酶 — “分子縫合針” DNA聚合酶 將 外源基因 送入 受體細胞 。 DNA聚合酶 DNA連接酶 區(qū)別 1 區(qū)別 2 相同點 ? DNA連接酶與 DNA聚合酶是一回事嗎 ?為什么 ? 1)只能將 單個核苷酸 連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 形成 磷酸二酯鍵 1)在 兩個 DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵 2)以 一條 DNA鏈為模板 ，將 單個核苷酸 通過磷酸二酯鍵 連接成一條互補的 DNA鏈 2)將 DNA雙鏈上的 兩個缺口同時連接 起來，不需要模板 二、 DNA連接酶 —— “分子縫合針” 二、 DNA連接酶 — “分子縫合針” 作用： 形成磷酸二酯鍵 恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。會出現(xiàn)自身環(huán)化現(xiàn)象 ? 分別用不同的限制酶切割兩個部位 ,這樣就不會 出現(xiàn)相同的黏性 (平 )末端 . 思考與探究 為什么限制酶不剪切細菌本身的 DNA？ 通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶的細胞，其 DNA分子中或者 不具備 這種限制酶的 識別切割序列 ，或者通過甲基化酶 將甲基轉(zhuǎn)移 到所 識別序列 的堿基上，使 限制酶不能將其切開 。 ? DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？ 會產(chǎn)生 相同的黏性 (平 )末端 ，然后讓兩者的黏性 (平 )末端 黏合
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