發(fā)育生物學(xué)——發(fā)育生物學(xué)研究技術(shù)(參考版)
2024-08-26 21:29本頁面
【正文】 如報(bào)道基因轉(zhuǎn)入體內(nèi)，如附近有內(nèi)源性增強(qiáng)子，就可啟動(dòng)報(bào)道基因的啟動(dòng)子激活。如將某些信號傳導(dǎo)受體的膜內(nèi)區(qū)域缺失等。 RNAi 技術(shù) 1) 雙鏈 RNA抑制含其同源序列基因的表達(dá)，抑制基因表達(dá)的新方法 2) 線蟲中：直接導(dǎo)入dsRNA。 2. 嗎啉代寡聚核苷酸 (MO): 利用反義寡聚核苷酸抑制特定 mRNA (5’UTR) 的翻譯而阻斷目的基因功能的方法。 2) 將外源基因轉(zhuǎn)化到 ES中，同 gene knockout 3) 小鼠雜交。 轉(zhuǎn)入由組織特異性啟動(dòng)子控制的 cre基因 3) 小鼠雜交， cre基因會在特異性組織中表達(dá)，切除靶基因，使之失活。 Crelox 系統(tǒng) 1) Cre編碼一種重組酶，可識別并結(jié)合位點(diǎn)并切除位于兩個(gè) LoxP 位點(diǎn)之間的序列。 1) 構(gòu)建用于基因重組的突變基因結(jié)構(gòu) 2) 重組基因?qū)肱咛ジ杉?xì)胞 (ES) 3) 注射 ES入胚胎中以獲得雜合性小鼠 4) 小鼠雜交獲得純合體小鼠并進(jìn)行表型分析。 3. 轉(zhuǎn)基因 。 基因修飾 1. 基因敲除 。常用的分子標(biāo)記包括單核苷酸多態(tài)性 (SNPs)。 ? 化學(xué)誘變或射線突變：定位克隆 (positional cloning)—根據(jù)目的基因在染色體上的位置進(jìn)行基因分離的。果蠅中為 P因子，可以隨即插入基因組中，并可以在基因組中移動(dòng)，包括特殊序列和轉(zhuǎn)座酶，后代生殖細(xì)胞中，轉(zhuǎn)座酶就會誘導(dǎo) P因子在基因中隨即轉(zhuǎn)座造成基因突變。 F1與野生型， F2 (50% 雜合突變體 )群體內(nèi)雜交， F3 (25%)可出現(xiàn) 純合突變 個(gè)體，發(fā)育異常 由含 GFP 基因的反轉(zhuǎn)錄病毒插入引起突變 正常胚胎 突變胚胎 X 基因 GF P 基因 完整的 X 基因使胚胎正常發(fā)育 X 基因被 G FP 基因破壞后胚胎異常發(fā)育DNA插入誘變法 反轉(zhuǎn)錄病毒插入引起的突變的鑒定 病毒注射 F0 WT F1 F2DNA插入誘變法 大規(guī)模誘變篩選 突變后的 表型 改變： ? 致死性 ? 功能喪失 ：最常見。 3. 突變基因
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