第二十章-蛋白質(zhì)的復性(參考版)
2025-08-08 10:44本頁面
【正文】 各種重組蛋白質(zhì)復性方法的比較 復性方法 復性率 蛋白濃度 過程集成性 成本 傳統(tǒng)方法 (稀釋、透析、超濾 ) 蛋白濃度低時高 蛋白濃度高時低 低 無 低 改進后傳統(tǒng)方法（溫度跳躍、分批進料、連續(xù)進料） 較高 較高 無 較低 新方法 抗體法 高 高 無 高 分子伴侶法 高 高 無 高 人造 分子伴侶法 高 高 無 較低 反向微團法 高 低 無 較低 雙水相法 不明 不明 將包涵體的溶解與蛋白的復性過程集成 較低 色譜法 高 高 將蛋白的復性與純化過程集成 較低 蛋白質(zhì)復性 復性效果的檢測與評價 。 色譜法復性 色譜復性方法 原理 復性蛋白 凝膠色譜 （ SEC） 蛋白質(zhì) Stokes半徑的差異和凝膠排阻作用 溶菌酶，牛碳酸酐酶， ， rhETS1， RNase A， tPA， Heterodimeric platelet derived growth factor 疏水色譜（ HIC ） 蛋白質(zhì)與介質(zhì)的疏水性相互結(jié)合 rhIFNγ， rhIFNβ， 重組人粒細胞集落刺激因子 rhGCCSF 離子交換色譜（ IEC） 蛋白質(zhì)與介質(zhì)間存在電荷作用力 Papiloma virus(HPV)， E7MS2 fusion protein， 重組白細胞分泌抑制因子 rSLPI，抗原疫苗蛋白 親和色譜（ AFC） 蛋白與配體的特異性親和吸附 重組人朊病毒 rhPrion，牛碳酸酐酶， IgG 蛋白質(zhì)復性 復性操作方法： 通過分子篩效應(yīng)將變性蛋白質(zhì)與變性劑加以分離 ,從而使變性蛋白質(zhì)進入復性溶液進行復性 . 舉例 : 核糖核酸酶 蛋白質(zhì)復性 包含體的復性 ， 對重組蛋白進行復性 . 一般的做法是將 110mg的蛋白質(zhì)溶入 12mL的變性緩沖液中 ,使蛋白充分變性 (一般在室溫下數(shù)小時或過夜 ), 然后在 superdex75 HR10/30 或sephacryI S系列柱上進行蛋白質(zhì)分子重折疊 ,從凝膠過濾柱上洗脫下來的樣品經(jīng)超濾濃縮回收 .利用此法成功地使分子內(nèi)有 9個半胱氨酸 ,分子量為50000Da的重組人 ETS1蛋白有效地復性 ,其構(gòu)象和天然構(gòu)象相同 . 蛋白質(zhì)復性 包含體的復性 ， 對重組蛋白進行復性 . 此方法的另一特點是 ,由多亞基組成的蛋白 ,變性的亞基可以在凝膠柱上締合 ,正確重折疊 .對于在凝膠柱上進行重折疊的機理尚不十分清楚 ,一種可能的解釋是在凝膠過濾柱上所進行的重折疊或分子亞基之間的締合 ,是在不可逆條件下進行的 ,因而克服了在溶液中常規(guī)重折疊過程中所遇到的主要問題
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