【正文】 樣品實(shí)測(cè)MN‰平均值污染指數(shù)（PI）＝——————————————— 標(biāo)準(zhǔn)水（對(duì)照組）MN‰平均值附：蠶豆根尖微核檢測(cè)記錄表試驗(yàn)號(hào) 鏡檢日期 鏡檢者【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】以小組為單位整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告；每人寫一份實(shí)驗(yàn)心得體會(huì)。4．如采用已篩選出的、專門隔離栽培、無(wú)污染的松滋青皮豆作實(shí)驗(yàn)材料，并按規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件（其對(duì)照本底MN‰為10‰以下），其監(jiān)測(cè)樣品污染程度的劃分，可不用上述（2)、（3)兩種統(tǒng)計(jì)處理方法，而直接采用如下標(biāo)準(zhǔn)：1) MN ‰ 在10 ‰ 以下為基本無(wú)污染；10 ‰－18 ‰ 區(qū)間為輕度污染；18‰－30‰?yún)^(qū)間為中度污染；30‰ 以上為嚴(yán)重污染。 如被監(jiān)測(cè)的樣品較多，可先用方差分析（F 檢驗(yàn)）看各采樣點(diǎn)（或各樣品）所出現(xiàn)的MN 千分率平均值和對(duì)照組差異的顯著性。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】將微核觀察記載表上所得數(shù)據(jù)，按如下步驟進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。凡符合以上三條的小核就是微核。鏡檢及微核識(shí)別標(biāo)準(zhǔn)將制片先置低倍顯微鏡下找到分生組織區(qū)細(xì)胞分散均勻、膨大、分裂相較多的部位，再轉(zhuǎn)到高倍鏡（物鏡40X）下進(jìn)行觀察。3) 加蓋一清潔的蓋玻片，注意不要有氣泡。制片1) 將幼根放在擦凈的載玻片上，用解剖針截下1 mm 左右的根尖。5) 除去染液，用SO2 洗滌液浸洗幼根2 次，每次5 min,6）用蒸餾水浸洗一次，5 min。4) 在暗室或遮光的條件下加席夫（Schiff）試劑，每瓶用量以淹住幼根液面高出2 mm 為好。2) 吸凈蒸餾水，再加人5 mol/L HCl 將幼根泡住，連瓶放人28℃水浴鍋中水解幼根25 min 左右，視根軟化的程度可適當(dāng)增減時(shí)間，當(dāng)幼根被軟化即可。2) 固定后的幼根如不及時(shí)制片，可換人70％的乙醇中，置4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?) 洗凈后的種子再放人新鋪好的濕脫脂棉的解剖盤（或鋁盒）內(nèi)，按前述培養(yǎng)條件使根尖細(xì)胞修復(fù)22 h－24 h，亦可在培養(yǎng)皿中用自來(lái)水浸住根尖修復(fù)培養(yǎng)。2) 處理時(shí)間4 h－6 h，視實(shí)驗(yàn)要求和被測(cè)液的濃度等情況而定。被監(jiān)測(cè)液處理根尖1) 每一處理選取6 粒－8 粒初生根尖生長(zhǎng)良好、根長(zhǎng)較一致的種子，放人盛有被測(cè)液的培養(yǎng)皿中，讓被測(cè)液浸泡住根尖即可。）2) 催芽 待種子吸脹后，用紗布松松包裹置解剖盤（或鋁盒）內(nèi)，保持濕度，在25 ℃的溫箱中催芽12 h－24 h，待種子初生根露出2 mm－3 mm 時(shí)，選取發(fā)芽良好的種子，放人鋪有薄層濕脫脂棉的解剖盤（或鋁盒）內(nèi)，仍置人25 ℃的溫箱中繼續(xù)催芽，注意保持濕度?！痉椒ú襟E】蠶豆浸種催芽1) 浸種 將當(dāng)年或前一年的蠶豆種子按需要量放人盛有自來(lái)水（或蒸餾水）的燒杯中，置25 ℃的溫箱內(nèi)浸泡24 h－36 h，此期間至少換水2 次，換用的水最好事先置于 25 ℃溫箱中預(yù)溫。此染色液在4℃冰箱中可保存6個(gè)月左右，如出現(xiàn)沉淀就不能再用。冷卻到58℃時(shí)過(guò)濾于深棕色試劑瓶中，待濾液冷至25 ℃時(shí)再加人10 ml 1 mol/lHCl 和1 g 偏重亞硫酸鈉或偏重亞硫酸鉀（Na2S2O5 或K2S2O5）充分振蕩使其溶解。固定根尖時(shí)隨用隨配。3．藥品1）5 mol/L HC1。種子成熟曬干后，為保證其發(fā)芽率，要貯于干燥器內(nèi)，或用牛皮紙袋裝好放人4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。本品種栽培繁殖時(shí)要注意不和其它蠶豆品種種在一起，不噴農(nóng)藥，以保持該品種較低的本底微核值?！緦?shí)驗(yàn)用品】實(shí)驗(yàn)材料松滋青皮豆（普通蠶豆代替） 蠶豆根尖細(xì)胞的染色體大，DNA 含量多，因而對(duì)誘變物反應(yīng)敏感。本檢測(cè)法的立論根據(jù)是：動(dòng)物、植物和人的外周血淋巴細(xì)胞等受到致突變物處理后都有增加微核的趨勢(shì)，并且它們的定性反應(yīng)一致性可達(dá)99％以上。目前微核測(cè)試已經(jīng)廣泛應(yīng)用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面 利用蠶豆根尖作為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行微核測(cè)試，可準(zhǔn)確的顯示各種處理誘發(fā)畸變的效果，并可用于污染程度的監(jiān)測(cè)。只有真核的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測(cè)試是一種比較理想的方法。所以可用簡(jiǎn)易的間期微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。這些斷片或染色體在細(xì)胞分裂末期被兩個(gè)子細(xì)胞核所排斥便形成了第三個(gè)核塊。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣?！净驹怼课⒑撕?jiǎn)稱（MCN)，是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，往往是細(xì)胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生。繪制所觀察到有絲分裂典型時(shí)期的染色體圖像，并簡(jiǎn)要說(shuō)明各時(shí)期染色體的行為變化和特征。 【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】制作細(xì)胞有絲分裂前、中、后、末各期的制片一張，中期應(yīng)能數(shù)清染色體數(shù)。末期：分開(kāi)在兩極的染色體各自組成新的細(xì)胞核，在細(xì)胞質(zhì)中央赤道板處形成新的細(xì)胞壁，使細(xì)胞分裂為二，形成二個(gè)子細(xì)胞。染色體分散，易于鑒定形態(tài)、數(shù)目。前期：核內(nèi)染色質(zhì)逐漸濃縮為細(xì)長(zhǎng)而卷曲的染色體，每一染色體含有兩個(gè)染色單體，它們具有一個(gè)共同的著絲點(diǎn)；核仁和核膜逐漸模糊不明顯。 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】間期：在光學(xué)顯微鏡下，只看到均勻一致的細(xì)胞核及許多的絲狀染色質(zhì)。封片保存如制片標(biāo)本符合要求，則把玻片放在干冰或冰箱中凍結(jié)，然后用刀片迅速把蓋玻片和載玻片分開(kāi)，用電吹風(fēng)吹干玻片，經(jīng)二甲苯透明后，滴中性樹(shù)膠，加蓋玻片封片，制成永久制片。調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)可變光欄與反光鏡，使光線明暗合適，視場(chǎng)亮度適中。鏡檢 通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少數(shù)，因此壓片后要認(rèn)真仔細(xì)地進(jìn)行鏡檢。染色 改良石炭酸品紅染色：解離后材料水洗3min并吸干，取1/2個(gè)根尖的乳白色分生組織于載玻片上夾碎搗爛，滴加1～2滴染液，染色10～15min，壓片。解離 常用酸解法：從70％乙醇中取出固定好的根尖→流水沖洗３min→吸水紙吸干→放入盛有適量1 mol/L HCl，60177。固定材料經(jīng)預(yù)處理后，用流水沖洗，然后投入卡諾液Ⅰ（3份甲醇∶1份冰乙酸，現(xiàn)配現(xiàn)用）中固定20～24h，用95％的乙醇洗兩次，轉(zhuǎn)入70％乙醇中保存?zhèn)溆谩ｎA(yù)處理 ％秋水仙堿或飽和對(duì)二氯苯水溶液中，以藥液浸沒(méi)根尖為度，處理3～4h。待側(cè)根長(zhǎng)到1～2cm時(shí)，于適宜時(shí)間用蒸餾水洗凈，將水吸干，～1cm進(jìn)行預(yù)處理?！痉椒ú襟E】發(fā)根％升汞消毒10min，經(jīng)流水沖洗，溫水浸泡1～2d后，置25℃恒溫箱中發(fā)根。 【實(shí)驗(yàn)用品】實(shí)驗(yàn)材料蠶豆（Vicia faba）等根尖器材顯微鏡、水浴鍋、剪刀、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、酒精燈等。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)娜〔奶幚怼⒐潭?、離析、染色、壓片等步驟，可獲得清晰的植物細(xì)胞有絲分裂染色體動(dòng)態(tài)變化的裝片。有絲分裂是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，可分為前期、中期、后期和末期。 【基本原理】有絲分裂是植物體細(xì)胞增殖的主要方式。附：各種主要試劑的作用Triton X100 (聚乙二醇辛基苯基醚)作用：非離子去垢劑；適當(dāng)濃度的Triton X100，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞骨架系統(tǒng)可被保存M－緩沖液和磷酸緩沖液作用：維持細(xì)胞的滲透壓EDTA（乙二胺四乙酸）和EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）作用：前者可螯合大部分金屬離子；后者專一性螯合Ca2＋，主要是高濃度的Ca2＋可是微管解聚，因此加入EGTA 來(lái)降低Ca2＋的濃度?！緦?shí)驗(yàn)用品】材料：新鮮洋蔥鱗莖試劑1） M 緩沖液（pH ）各成分終濃度為：50mmol/L 咪唑(MW:)； 50mmol/L KCl(MW:)； 它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔?。由于?xì)胞經(jīng)TritonX100 抽提后剩下的主要是細(xì)胞骨架成分，使得顯現(xiàn)更清晰。目前研究細(xì)胞骨架的主要方法是應(yīng)用高壓電鏡或免疫熒光顯微鏡技術(shù)。當(dāng)用適當(dāng)濃度的TritonX100 處理細(xì)胞時(shí)，能溶解質(zhì)膜結(jié)構(gòu)中及細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻不被破壞顯得更清晰，M緩沖液洗滌細(xì)胞，可以提高細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性，戊二醛固定能較好地保存細(xì)胞骨架成分，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)R250 染色后，可使細(xì)胞骨架蛋白著色，而胞質(zhì)背景著色弱，有利細(xì)胞骨架纖維顯示。十二、細(xì)胞骨架系統(tǒng)的顯示與觀察【目的要求】掌握植物細(xì)胞骨架的光鏡標(biāo)本制作方法?！緦?shí)驗(yàn)報(bào)告】在顯微鏡下按順序繪制所觀察到的細(xì)胞融合各階段，并注明主要特點(diǎn)?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)同核體細(xì)胞。（每4 人）取懸液1mL 到1 個(gè)試管中， mL 預(yù)熱的50％PEG 混勻，置于30℃水浴中溫浴3－5min；取未融合和融合的血細(xì)胞懸液各1 滴分別滴于載玻片上的兩側(cè)，蓋上蓋玻片。棄上清液(用吸管吸去)，％生理 鹽水5mL，用指彈法（或吸管輕吹）將細(xì)胞團(tuán)塊彈散，混勻后1000r／min 離心5min；重復(fù)上述條件，再離心洗滌1 次。（共2 組）取雞紅細(xì)胞懸液1mL，移入10mL 離心管， 加入4mL ％生理鹽水混勻。普遍認(rèn)為聚乙二醇分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，從而使細(xì)胞發(fā)生融合。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎?、?jiǎn)便，且融合效果穩(wěn)定。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，如研究核質(zhì)關(guān)系、繪制染色體基因圖譜、制備單克隆抗體、育種等。這一技術(shù)已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合、種間細(xì)胞融合，而且也能誘導(dǎo)動(dòng)植物細(xì)胞間產(chǎn)生融合。人工細(xì)胞融合開(kāi)始于五十年代，六十年代到七十年代作為一門新興的技術(shù)發(fā)展很快，應(yīng)用范圍極廣?！净驹怼?jī)蓚€(gè)以上的細(xì)胞合并成為一個(gè)雙核或多核細(xì)胞稱為融合細(xì)胞。繪出小麥幼根根尖組織液泡系的形態(tài)與分布并簡(jiǎn)要分析 。小麥（或綠豆）幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察小麥（或綠豆）幼苗根尖（12cm）縱切面切片，1/3000 中性紅溶液1 滴染色510min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察。中性紅對(duì)液泡系的染色具有專一性，將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，從而使線粒體顯色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無(wú)色狀態(tài)?；铙w染色是應(yīng)用無(wú)毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。結(jié)果分析時(shí)所加試劑和濃度觀察雞紅細(xì)胞對(duì)不同物質(zhì)的通透性1）取一支試管， 的Nacl 溶液4ml， 雞紅細(xì)胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如出現(xiàn)溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時(shí)間（從加入4ml 溶液算起）2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（以PBS 緩沖液加2％血細(xì)胞作對(duì)照實(shí)驗(yàn)）[土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液