實(shí)驗(yàn)十dna片段從瓊脂糖凝膠中的分離(參考版)
2025-07-21 22:10本頁(yè)面
【正文】 。 ?加 20ul或更多的“基因純”試劑（每 ul該試劑可吸附 ，操作者可根據(jù)這一指標(biāo)自行決定“基因純”試劑的用量，但不應(yīng)少于 10ul）。 ?以下步驟與“從瓊脂糖凝膠中分離純化 DNA片段”中步驟 d到 j相同。 從探針制備反應(yīng)中除去未標(biāo)記上的核苷酸及小的 DNA片段 ?探針制備反應(yīng)完畢后，加蒸餾水至 100ul（最后體積）。 ?加入 300ul碘化鈉溶液，混勻。 ? 步驟 h是另一關(guān)鍵，管壁和管底殘留的洗滌液若不完全除去，可能導(dǎo)致“基因純”試劑上結(jié)合的 DNA無(wú)法由蒸餾水洗脫。 注意事項(xiàng) ： ? 溴化乙錠染色后的 DNA易受紫外光破壞，故盡量放置于暗室，切帶時(shí)應(yīng)使用長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外燈，切膠時(shí)間盡量短。 ?j. 離心 3分鐘，將上清液小心吸至另一個(gè)離心管，即為純化的 DNA。 ?h. 用吸水紙仔細(xì)將管壁上及管底殘留的洗滌液吸干。 ?f. 加 DNA洗滌液，充分搖勻，離心 10秒，去上清。 ?d. 加入 20ul充分混勻的“基因純”試劑（建議使用前用漩渦振蕩器振蕩 3分鐘），室溫放置 5分鐘（期間不時(shí)將管子顛倒幾次以混勻）。（如 ）。按常規(guī)方法用溴化乙錠（ EB）染色DNA，而后將欲分離的 DNA帶從膠上切割下來(lái)，置于一。 二、試劑盒組成 ? 1．碘化鈉溶液： 50ml ? 2． DNA洗滌液（ 20倍濃縮液）： 10ml ? 3．“基因純”試劑： 1ml ? 4．超純水： 1ml ? 使用前，將 DNA洗滌濃縮液（ 10ml）倒入一玻
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