實(shí)驗(yàn)13瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法(參考版)
2025-05-17 16:29本頁(yè)面
【正文】 較新式的儀器電極間的 角度和 29 按電泳法分： 按超速離心法分： 乳糜微粒 （ CM） 乳糜微粒 CM ( ) ?脂蛋白 （ ?位 ） 極低密度脂蛋白 VLDL(?) 前 ?脂蛋白 （ ?2位 ） 低密度脂蛋白 LDL (?) ?脂蛋白 （ ?1位） 高密度脂蛋白 HDL(?) 六、血漿脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 30 31 32 pH pI ， 各 種 脂蛋白均 帶負(fù)電 ， 電 泳 時(shí) 由 負(fù)極 到正 極 ； VLDL為圓 形 ， 受阻力小 ， LDL形 態(tài) 不規(guī)則 ， 受阻力大 ， 所以 VLDL跑 在前 。 DNA分子凈移動(dòng)方向與加樣線 (圖中點(diǎn)線 )垂直，使樣品中各組分沿同一泳道形成各自的區(qū)帶。在每次電場(chǎng)方向改變時(shí)，DNA分子就要有一定的時(shí)間松弛，改變形狀和遷移方向。電泳時(shí)， DNA分子處在連續(xù)間隔交替的電場(chǎng)中。 置于中央，電場(chǎng)在 NS和 WE之間交替建立。電泳系統(tǒng)是由一個(gè)水平式電泳槽和兩組獨(dú)立，彼此垂直的電極組成，一組電極負(fù)極為 N，正極為 S；另一組負(fù)極為 W，正極為 E 。 五、交變脈沖電場(chǎng)凝膠電泳 27 1983年， Schwartz等人根據(jù) DNA分子彈性弛豫時(shí)間 (外推為零的滯留時(shí)間 )與 DNA分子大小有關(guān)的特性，設(shè)計(jì)了脈沖電場(chǎng)梯度凝膠，交替采用兩個(gè)垂直方向的不均勻電場(chǎng)，使 DNA分子在凝膠中不斷改變方向，從而使 DNA按分子大小分開(kāi)。這是因?yàn)樵诃傊悄z中， DNA分子的有效直徑超過(guò)凝膠孔徑時(shí)，在電場(chǎng)作用下，迫使 DNA變形擠過(guò)篩孔 ，而沿著泳動(dòng)方向 伸直 ，因而分子大小對(duì)遷移率影響不大。適當(dāng)提高電壓或電流可以提高轉(zhuǎn)移速度，但亦會(huì)增加熱效應(yīng)，故電壓或電流不可過(guò)高。用于轉(zhuǎn)移電泳的支持膜亦有多種選擇，近些年用尼龍膜較多，因?yàn)槟猃埬C(jī)械性能好，烘烤不變脆，使用時(shí)比硝酸纖 進(jìn)行印跡轉(zhuǎn)移電泳時(shí)，要注意緩沖液的離子強(qiáng)度要低， pH要遠(yuǎn)離 pI，使蛋白質(zhì)帶有較多電荷，一般用穩(wěn)定性較好的Tris緩沖體系。 1982年 Reinhart等用電轉(zhuǎn)移法將等電聚焦后的蛋白質(zhì)區(qū)帶從凝膠轉(zhuǎn)移到特定膜上 ， 稱 Eastern印跡 23 目前國(guó)內(nèi)外有多種核酸、蛋白質(zhì)印跡轉(zhuǎn)移的電泳裝置出售，使印跡轉(zhuǎn)移速度
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