【正文】 細胞膜、核膜結(jié)構(gòu)概念：免疫組織化學(xué)技術(shù)是指利用已知的抗 體與組織中相應(yīng)的抗原結(jié)合，并利用 顯色劑在原位將抗原物質(zhì)顯示出來原理：抗原＋抗體＋顯色劑特點：在組織中原位顯示某種特異性抗原常用顯色劑種類：酶、金屬粒子、同位素 生物素、化學(xué)顯色劑（DAB）結(jié)果觀察：顯微鏡、透射電鏡 抗 原 ← 組織中 + 抗 體 ← 試劑 ↓ 抗原抗體復(fù)合物 + 第二抗體 ← 標記有顯色底物 ↓ 顯色反應(yīng) ← 顯色劑 (DAB)。 彈力纖維? 酶類? 脂類 ? ?其結(jié)果可用顯微鏡和電鏡觀察。％酒精（乙醇〕，除具有固定組織的作用外，尚有脫水作用? 固定要求：；；? 一般用10%甲醛溶液固定，不易用有色的混合固定液。? ： 越新鮮越好? 1〕固定的目的： 將受檢組織盡快地侵入固定液內(nèi)，使組織和細胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐敗，使其保持與生活狀態(tài)有相似的結(jié)構(gòu)，以利于切片和觀察。? ： 即等待涂片自然或吹風(fēng)機吹干后在固定。涂片固定? : 即趁標本新鮮而濕潤時即投入固定液內(nèi)，這種標本染色后，染色鮮艷，結(jié)構(gòu)清楚。 巴氏染色步驟1．標本95％酒精固定35分鐘2．Harris蘇木素液510分鐘3．水（蒸餾水或自來水）漂洗23次4．1％鹽酸水溶液（或1％鹽酸酒精液） 浸13次5．自來水浸洗12次6．自來水或稀碳酸鋰（100ml蒸餾水中加碳酸鋰飽 和液1滴），涂片返藍為止 7．依次置入70％→80％→95％酒精， 各2分鐘 8．桔黃G6液，1分鐘 9．95％酒精Ⅰ、Ⅱ缸，各1分鐘10．EA36液，5分鐘11．95％酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 各1分鐘12．無水酒精Ⅰ、Ⅱ，各1分鐘13．二甲苯Ⅰ、Ⅱ，各2分鐘14．中性樹膠蓋片封固涂片制備? 注意要點：；，不易太厚或太??；。? 對于腫瘤，只做初步診斷，確診依據(jù)活體組織學(xué)檢查。第八章 細胞學(xué)檢查技術(shù)? 細胞學(xué)檢查是腫瘤病理診斷和普查較常用方法。淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）? 2〕染色步驟：? （1〕蘇木素染色液浸染2分鐘；? （2〕%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘；? （3〕流水洗，蒸餾水洗2次；? （4〕剛果紅染色液中25分鐘；? （5〕無水乙醇迅速脫水2次；? （6〕二甲苯透明，中性樹膠封固。? 1〕試劑配制：? （1〕剛果紅染色液。PASM染色法：? （1〕1％過碘酸水溶液內(nèi)染10分鐘；? （2〕自來水沖洗，蒸餾水沖洗；? （3〕入5％鉻酸水溶液40分鐘，出此溶液后用1％亞硫酸鈉除掉鉻酸；? （4〕自來水洗數(shù)次，蒸餾水洗3－4次；? （5〕入六胺銀染液（50－60℃〕40分鐘，20分鐘后，每5分鐘鏡下觀察一次，蒸餾水洗四次；? （6〕%氯化金水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗三次；? （7〕入5％硫代硫酸鈉水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗數(shù)次；? （8〕復(fù)染HE，脫水、透明、封片? 結(jié)果：底膜呈黑色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，細胞核呈藍色，背景呈粉紅色四、淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）? . 淀粉樣物質(zhì)是一種嗜伊紅性物質(zhì)，性質(zhì)屬于糖蛋白成分。Verhoeff鐵蘇木素染色法三、六胺銀（PASM〕染色? 在腎臟活體組織檢查和一些真菌感染的組織選用此方法PASM染液的配方：? 2％硝酸銀水溶液3ml；? 3％六次甲基四胺液25ml；? 5％硼砂2ml。? 試劑配制：? 地衣紅酒精液 1g? 70%酒精 100ml? 濃鹽酸 1ml? 結(jié)果：TanerUnna法，彈力纖維呈深棕紅色。試劑配制：蘇丹染液，70%乙醇250ml，丙酮250ml染色方法：；，把標本放入蘇丹III染液中浸泡30min；％乙醇分化，以脂肪組織呈橙黃色，其它組織不著色為佳；％甲醛液中，為了防腐可加入適量的防腐劑。 特殊染色法是為了達到某些特殊的要求，或是為了觀察特殊的組織結(jié)構(gòu)。第七章 特殊染色 HE染色雖是一種快速、經(jīng)濟、且易掌握的方法，但它不能回答病因?qū)W、Z組織發(fā)生及發(fā)病機制等方面的許多問題。? 。 厚薄不勻或呈波浪狀等現(xiàn)象。（4）要認真操作，細心觀察，不斷總結(jié)。（2）對各種組織應(yīng)視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應(yīng)分化較長時間等。如何使樹膠處于中性狀態(tài)？ 取少量無水碳酸鈉，加入到封固用的樹膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹膠。（4）易變質(zhì)或易氧化失效的試劑，應(yīng)標明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應(yīng)本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費。（2）易燃的試劑要遠離火種，謹防火災(zāi)，因病理科有較多的易燃化學(xué)試劑。滑動面要經(jīng)常滴上機油，以利于滑動及旋轉(zhuǎn)自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機，以防灰塵落于機上，影響機器的運轉(zhuǎn)。當(dāng)打不開瓶蓋時應(yīng)放入烤箱中烘烤，即可打開。（10）封固切片時，盛膠的瓶子及瓶蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當(dāng)切片干燥時，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導(dǎo)致一半切片沒有被膠封固的結(jié)果。這樣的切片很容易裉色。（7）切片致無水酒精后，不要在控干無水酒精時讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進入碳酸二甲苯（也可以進入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（5）切片分化時，要根椐不同的組織來確定分化時間，并不斷積累經(jīng)驗。（4）切片在蘇木素的染色時間應(yīng)充分寧過勿不足。（3）切片染蘇木素前可令其無水化，這樣可延長蘇木素的壽命?？杉铀倨淙旧^程，并使胞漿的色澤更為艷麗HE染色過程中的要點：? 切片脫蠟務(wù)必干凈徹底? 脫苯和酒精要徹底? 蘇木素染色液配制及鹽酸酒精分化較為重要? 各級水洗應(yīng)充分及伊紅染色要適當(dāng)? 切片固封樹膠要適當(dāng)染色時的注意事項（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。 ? HE（Hematoxin Eosin,HE〕染色? 1〕蘇木素染色配方：? 蘇木素 1g? 純酒精 10ml? 鉀明礬 20g? 蒸餾水 200ml? 氯化汞 ? 2〕伊紅染色配方：? 伊紅 ? 蒸餾水 99ml伊紅染液? 5—10分鐘 l－2分鐘? 透明1—2分鐘（20）無水酒精III—2分鐘（I9）無水酒精 I1－2分鐘（18）95%酒精 II 片刻（17）95％酒精I 1分鐘（14）流水沖洗 —1分鐘（12）流水沖洗 片刻（11）1%鹽酸酒精分化 10—15分鐘（10）自來水沖洗 片刻（9） 蘇木素液染核 5分鐘逐級降濃度酒精水化脫二甲苯（3）無水酒精I（變?yōu)椴煌该鳎? 5分鐘（2）二甲苯II（應(yīng)完全透明）染色步驟:脫蠟（1）二甲苯I? ⒉促染劑：能使組織易于著色的物質(zhì)，它與媒染劑不同，不直接參與染色反應(yīng)，如醋酸、碳酸等。 一、染色? 目的: 將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細胞等成分染上不同的顏色 產(chǎn)生不同的折射 ,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察.? 方法: 蘇木素 伊紅染色稱常規(guī)染色,又稱HE染色. 其他染色方法稱特殊染色(特染).染色原理? 化學(xué)反應(yīng)： 利用組織細胞內(nèi)酸堿性的不同，其與陰陽離子結(jié)合力的不同，染色也不同。細胞核呈藍色，軟骨基質(zhì)鈣鹽深藍色，胞漿呈深度不同的粉紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，膠原纖維量粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，切片完整，未見有冰晶出現(xiàn)。（2）把水洗后的切片插入裝有蘇木素的玻璃瓶中超聲波處理30sec或1min,水洗、分化、放于裝有熱水的玻璃瓶中、超聲波處理3