【正文】 謝 謝！ 。 — 為達到預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。 擬解決的關(guān)鍵問題 獲得 SP1直接調(diào)控 bim基因表達的可靠依據(jù)。這些研究工作改變了以往的觀點 ,也是本項目重要的立項依據(jù)之一。 我們首次報道了神經(jīng)元凋亡時 JNK/cJun不參與 bim的上調(diào) [1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了 PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo) bim的上調(diào) (未發(fā)表資料 )。研究方向主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控。 寫好申請書是申請成功的關(guān)鍵 ? 評審實際上只評申請書 ? 學(xué)術(shù)水平高不等于成功 ? 基金評審相對公正 撰寫前的準(zhǔn)備 ? 好心情、好身體 想好再寫 3h /天 ? 讀指南、讀通知 注意截止期 ? 熟知申請過程、有關(guān)規(guī)定 ? 讀標(biāo)書、讀高手、讀同行、讀自己 ? 選題 賣點：創(chuàng)新性 工作基礎(chǔ) ? 溝通 科研科、醫(yī)科處 工作基礎(chǔ) ： 本項目是在原工作基礎(chǔ)上的繼續(xù)和深入。近三年，藥理教研室獲得學(xué)科建設(shè)資金 3000萬元，已購置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機、流式細胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。 項目負責(zé)人黎明濤所在單位 —— 中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院藥理教研室是 211項目資助學(xué)科和國家重點學(xué)科。 近三年 ， 培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科研隊伍 。 工作條件 2022年回國 ， 獲得 211基金 180萬元 ， 組建了一流的分子 、細胞生物學(xué)實驗室 。在 cJun促凋亡靶基因的研究方面取得一定成績：首次證實 bim不是 cJun的靶基因 (Neurosci Lett, 2022)，并從源頭 尋 找和確立了若干介導(dǎo)凋亡的新的 cJun靶基因。這些寶貴的研究資料是本項目重要的工作基礎(chǔ)之一。 研究基礎(chǔ) 3. 申請人已經(jīng)排除了 AKT、 PKA、 p90RSK參與去極化時 GSK3磷酸化，經(jīng)一致序列分析和抑制劑實驗，提出 CaMKII介導(dǎo) GSK3磷酸化的可能性，進一步的體外重組激酶反應(yīng)分析證明， CaMKII可直接磷酸化 GSK3α Ser21/ GSK3β Ser9。申請人曾發(fā)現(xiàn) PKA可以直接使 GSK3β的 Ser9磷酸化并抑制其活性，并進而闡明了 cAMP/PKA 通過磷酸化并抑制 GSK3β發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用 (Mol Cell Biol, 2022)。 研究基礎(chǔ)與工作條件 — 突出與項目相關(guān)的工作積累 1. 研究基礎(chǔ) 已取得的研究工作成績及與本項目有關(guān)的研究工作積累 (對于自由申請項目，著重填寫申請人近期的主要工作業(yè)績；對于重點項目，請著重填寫本課題組與本項目相關(guān)的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績 ) 2. 工作條件 已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑 (包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況 ) 研究基礎(chǔ) 申請人近年有如下工作積累和成績 ： 1. 申請人多年的研究興趣主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與基因調(diào)控、帕金森病的研究方面，發(fā)表了 36篇與神經(jīng)元凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的 SCI論文，其中作為第一作者的有 2篇，作為通訊作者的有 10篇，作為共同作者的有 24篇。 根據(jù)以上生物信息學(xué)分析和實驗觀察 ， 我們首次提出了 SP1介導(dǎo) bim上調(diào)這一新的 bim轉(zhuǎn)錄機制：神經(jīng)元凋亡時轉(zhuǎn)錄因子 SP1被激活 ， 激活的 SP1與 bim啟動子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合 ， 從而轉(zhuǎn)錄激活 bim的表達 。 bim上調(diào)的轉(zhuǎn)錄機制是什么 ？ 我們率先對 bim啟動子進行了 5‘末端序列續(xù)減分析 ， 確立了誘導(dǎo) bim表達的啟動子核心區(qū) ， 進而發(fā)現(xiàn)一個典型的轉(zhuǎn)錄因子 SP1結(jié)合序列位于其中 。本人將此視為完成本項目的寶貴條件之一。不予資助。我甚至擔(dān)心這個在研的項目都不能完成。因此，可行性極差。 項目創(chuàng)新性不明顯，研究目標(biāo)或科學(xué)問題不明確，申請書撰寫非常凌亂，沒有條理。最近，已有報道， eCBs通過 PI3K/Akt通路保護神經(jīng)元（ Selective CB2 receptor agonism protects central neurons from remote axotomyinduced apoptosis through the PI3K/Akt Neurosci. 2022， 29:456470）。但是，不知申請人是否已有 COX2介導(dǎo)神經(jīng)元損傷的證據(jù)？這一資料的缺失使得立項依據(jù)不很充分。 獲得資助的決定因素 ? 科學(xué)問題，創(chuàng)新性 ? 工作基礎(chǔ)、 SCI文章 ? 依據(jù)充分 ? 目標(biāo)明確 ? 研究內(nèi)容具體 ? 技術(shù)路線清晰 ? 重點突出、方案合理 ? 國際合作 可行性分析 －從 學(xué)術(shù)思想角度提出 1. 工作基礎(chǔ) （學(xué)術(shù)思想） 2. 科研梯隊 3. 實驗條件 4. 實驗技術(shù) 5. 交流與合作（國內(nèi)、國外） 申請人觀察到內(nèi)源性大麻素（ Endocannabinoids,eCBs, 如 2－ AG）可抑制 COX2的表達，并根據(jù) eCBs保護神經(jīng)元這一事實（已有報道），推測或假設(shè) eCBs可能是通過抑制COX2發(fā)揮其保護神經(jīng)元的作用。項目有相關(guān)的工作基礎(chǔ)，研究隊伍結(jié)構(gòu)合理，具備相應(yīng)研究的工作條件。選題創(chuàng)新性強，研究內(nèi)容較系統(tǒng)，研究重點突出，所選擇的關(guān)鍵問題準(zhǔn)確。建議優(yōu)先資助。展示的預(yù)實驗結(jié)果，顯示了申請者在 GSK－ 3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路方面扎實的工作基礎(chǔ)與研究方案的合理可行。項目在 GSK－ 3神經(jīng)元凋亡中作用的原有發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)上，提出的 GSK－ 3磷酸化及其具體信號通路的工作假設(shè)具有很強的創(chuàng)新性與系統(tǒng)性。申請人及課題組人員研究能力強，工作基礎(chǔ)好。該項目擬進一步證實C