【正文】 1 張時(shí)民. 血細(xì)胞分析儀50年的發(fā)展歷史和展望.如有不妥或錯(cuò)誤請(qǐng)大家指正。小結(jié)：本文從全自動(dòng)五分類式血細(xì)胞分析儀談起，主要介紹各種品牌和代表類型的儀器在白細(xì)胞分析和分類上的不同原理和散點(diǎn)圖特征，這些儀器應(yīng)該是目前國(guó)內(nèi)在應(yīng)用五分類血細(xì)胞分析儀上有代表性的儀器。也可配置自動(dòng)涂片和自動(dòng)染色機(jī)完成血涂片的前期預(yù)備性工作。可形成帶有白細(xì)胞分類圖的結(jié)果報(bào)告。系統(tǒng)還可與血細(xì)胞分析儀連接，獲取血細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果，形成血細(xì)胞自動(dòng)化分析+形態(tài)學(xué)報(bào)告的更加完美的結(jié)果。對(duì)儀器不能確認(rèn)的細(xì)胞，可通過(guò)屏幕調(diào)出，放大觀察，再確認(rèn)類別。圖18 Cellavision拍攝的中性桿狀核粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和幼稚細(xì)胞圖片將所提取的特征信息轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)，然后通過(guò)人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)（ANN）進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。儀器分析原理：首先在10倍物鏡頭下搜索單細(xì)胞層，轉(zhuǎn)換40倍物鏡頭后拍攝紅細(xì)胞圖像，再轉(zhuǎn)換100倍油鏡頭后，在鏡油加入后，在單細(xì)胞層掃描拍攝有核的白細(xì)胞，其所搜尋拍攝的白細(xì)胞數(shù)量可自行定義。5 數(shù)據(jù)光電轉(zhuǎn)換系統(tǒng) 數(shù)碼相機(jī)拍攝后的數(shù)字圖像信息，將光學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變成數(shù)字信號(hào)，然后對(duì)每個(gè)視野下的圖像進(jìn)行分析，辨識(shí)單細(xì)胞層，白細(xì)胞定位點(diǎn)，從而為軟件系統(tǒng)的白細(xì)胞分類提供源數(shù)據(jù)。4 自動(dòng)血涂片掃描系統(tǒng) 包括一臺(tái)具有物鏡頭自動(dòng)轉(zhuǎn)換、血涂片可三維方向移動(dòng)的自動(dòng)顯微鏡和一臺(tái)具有自動(dòng)調(diào)焦能力的數(shù)碼照相機(jī)。3 自動(dòng)加油系統(tǒng) 自動(dòng)吸取適量的顯微鏡油，滴加到血涂片適當(dāng)?shù)奈恢?，用于油鏡頭下的細(xì)胞觀察和分類。血片可按照順序被儀器傳輸系統(tǒng)傳送到顯微鏡載物臺(tái)上。1 血片自動(dòng)傳輸系統(tǒng) 將染色后的標(biāo)準(zhǔn)血涂片放在片盒內(nèi)。檢驗(yàn)醫(yī)師在Cellavision顯示屏前審查白細(xì)胞分類結(jié)果該系統(tǒng)是以染色后的血涂片為標(biāo)本，以最接近傳統(tǒng)顯微鏡觀察法的技術(shù)對(duì)血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞進(jìn)行初步分類的儀器，該儀器采用先進(jìn)的人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)和全自動(dòng)的操作程序，可使血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、智能化方面達(dá)到一定的目的和水準(zhǔn)，在強(qiáng)調(diào)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)重要性的背景下有良好的發(fā)展前景。近年來(lái)瑞典CellaVision AB公司開(kāi)發(fā)出一種新型自動(dòng)影像血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)CellaVision已經(jīng)投入臨床應(yīng)用，該產(chǎn)品2005年3月在歐洲開(kāi)始投放市場(chǎng),已經(jīng)有許多實(shí)驗(yàn)室配備了該系統(tǒng)，用于進(jìn)行血涂片的過(guò)篩檢查，該產(chǎn)品2007年進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，正處于推廣中。文章開(kāi)始部分已經(jīng)提到在1982年日本日立公司生產(chǎn)的8200型白細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)，應(yīng)該是此類儀器的原始機(jī)型。圖15 邁瑞五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖特征該方法可以有效排除難溶性紅細(xì)胞、巨大血小板、血小板聚集及其它非細(xì)胞顆粒等因素對(duì)計(jì)數(shù)的影響，保證嗜堿性粒細(xì)胞及WBC總數(shù)的精確分類和計(jì)數(shù)。而化學(xué)染色技術(shù)可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確判定。綜合這兩個(gè)角度散射光的信息，結(jié)合其他特殊技術(shù)來(lái)完成白細(xì)胞的五分類測(cè)定。~20176。~5176。激光散射分析技術(shù)是五分類法常用的分析技術(shù)，由于細(xì)胞的物理特性，當(dāng)激光照射到細(xì)胞時(shí)，會(huì)有不同角度的散射光出現(xiàn)。儀器通過(guò)兩個(gè)通道完成白細(xì)胞分類測(cè)定。測(cè)定速度為80個(gè)標(biāo)本/小時(shí)（配自動(dòng)進(jìn)樣器），全中文的操作界面，操作及提示功能一目了然，具有大型彩色TFT觸摸屏，操作簡(jiǎn)單方便。BC5500型為目前最高配置，可選擇使用靜脈血或預(yù)稀釋末梢血，均能獲得良好的各種細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和白細(xì)胞五分類結(jié)果。邁瑞（MINDRAY）公司是國(guó)內(nèi)最早有能力生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家，他們目前生產(chǎn)有三種型號(hào)的五分類血細(xì)胞分析儀。在MAIN散點(diǎn)圖上（大圖部分）下面散點(diǎn)表示淋巴細(xì)胞群，右側(cè)為粒細(xì)胞群；兩個(gè)小圖，NEEO為中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖，MOBA為單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞細(xì)胞散點(diǎn)圖。Size表示血細(xì)胞的大小、Complexity表示白細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜度、Granularity表示白細(xì)胞顆粒的程度。在鞘流液中白細(xì)胞通過(guò)管路進(jìn)入鞘流池內(nèi)，激光照射白細(xì)胞后發(fā)生的各種散射光，根據(jù)血細(xì)胞的體積、血細(xì)胞的復(fù)雜性（有無(wú)顆粒、核的構(gòu)造等）的不同，散射光的強(qiáng)度和方向有所不同。圖14 日本光電MEK7222型五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖日本光電公司是開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家之一，目前所知僅有兩款類型的儀器投入市場(chǎng)，均采用相同的測(cè)定原理，型號(hào)是MEK7222和MEK8222。該類型儀器除了基本的白細(xì)胞五分類外，還提供了其它異常白細(xì)胞的信息和報(bào)警，提供給檢驗(yàn)者參考，以通過(guò)人工顯微鏡檢查復(fù)核這些結(jié)果，例如異常淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、桿狀核中性粒細(xì)胞。ABBOTT的五分類法定量很有意思，不用傳統(tǒng)的體積定量，而是采用數(shù)量定量，每次計(jì)數(shù)時(shí)完成10000個(gè)細(xì)胞測(cè)定即停止。），主要對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞成分進(jìn)行測(cè)量。垂直光散射（70176。），基于顆?？梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀竦奶匦裕瑢⑹人峒?xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來(lái)。為消偏振光散射（70176?！?1176。）光，可粗略地測(cè)定細(xì)胞大??；②10176。為前向角散射（1176。在鞘流系統(tǒng)的作用下，樣本被集中為一個(gè)直徑30μm的小股液流，該液流將稀釋的血細(xì)胞單個(gè)排列，然后通過(guò)激光束，激光照射于細(xì)胞上，在各個(gè)方向都有其散射光出現(xiàn)。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，因嗜堿性粒細(xì)胞顆粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。該技術(shù)基本原理是細(xì)胞在激光束的照射下，在多個(gè)角度都產(chǎn)生散射光，儀器在四個(gè)角度的四個(gè)檢測(cè)器將接收到的相應(yīng)的散射光信號(hào)，然后經(jīng)過(guò)微處理器分析處理，將各類細(xì)胞安置在散點(diǎn)圖上的相應(yīng)位置，并計(jì)算出白細(xì)胞分類結(jié)果。采用新技術(shù)擴(kuò)展了散點(diǎn)圖分布范圍，形成可對(duì)血液中未成熟的粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞共20個(gè)參數(shù)的分類或提示性報(bào)告信息，這對(duì)異常血細(xì)胞的篩檢提供了很大幫助。在白細(xì)胞計(jì)數(shù)過(guò)程中還采用了白細(xì)胞平衡檢測(cè)原理（WBC Count Balance），使得白細(xì)胞計(jì)數(shù)在WBC/HGB通道中與LMNE雙鞘流池計(jì)數(shù)結(jié)果相聯(lián)系，如果出現(xiàn)較大差別則可進(jìn)行報(bào)警提示。此為在軟件系統(tǒng)中采用了浮動(dòng)界標(biāo)技術(shù)用于血小板計(jì)數(shù)及嗜堿細(xì)胞計(jì)數(shù)，直方圖的界標(biāo)會(huì)依據(jù)細(xì)胞群的變化做出相應(yīng)的自動(dòng)調(diào)整。圖10 ABX血細(xì)胞分析儀LMNE散點(diǎn)圖和BASO直方圖在直方圖上可以看出在中心界標(biāo)左側(cè)的是細(xì)胞體積變小的其它細(xì)胞群，界標(biāo)右側(cè)是體積較大的嗜堿性粒細(xì)胞。細(xì)胞通過(guò)一個(gè)