【正文】 第五步 保存程序 Gene Company Limited 基因有限公司 21 廣州聯絡處 ：廣州市天河東郊工業(yè)園建工路 8 號 6 樓 B 室 (郵編： 510665) 電話： (020)85524840 傳真： (02085528003， Email: 劉偉： tel(020)85524840 1057 MP:13570569160 Email: 點擊 File Save As 選擇相應的路徑，輸入程序名稱，保存程序 以上五步 由向導指引 完成了一個 Protocol 的全部設置，這五個步驟可以根據實驗的要求進行 個性化 的組合， 使程序的設置滿足實驗的要求 第六步 進行一次實驗 1 點擊工具欄中 圖標，打開一個新的實驗，彈出程序選擇對話框 2 在相關目錄下選擇已經保存好的 Protocol，打開該 Protocol 3 彈出該程序所對應的檢測項目，這時如果需要改變，可以點擊上方工具欄中對應的彩色圖標 ，進行修改，直到滿意為止 4 讀板，單擊 按鈕，彈出讀板對話框，輸入相關的信息后點擊 Read，開始讀板。 設置成功后點擊 OK，向導精靈提示這一步結束 ，點擊 Next 進入下一步。 讀板完成后，查看每個檢驗標準的檢驗情況 (根據實驗結果在以下三個對話框中填入信息 )： Valid Text 條件匹配 Invalid Text 條 件不匹配，計算的結果可信度不高。進行分類的數據首先和第一個分類的標準（ ）進行比較，如果小于第一臨界值就表示為 LOW，如果大于等于第一個臨界值則表示為“ HIG”，其他依次類推 ，可以設定不同級別的分類標準。 Cutoffs 輸入臨界值，臨界值可以是數字，也可以是公式或者孔符號。每次設置結束點擊 OK保存設置 3 Cutoff：雙擊 圖標，進入臨界值設定界面 Gene Company Limited 基因有限公司 19 廣州聯絡處 ：廣州市天河東郊工業(yè)園建工路 8 號 6 樓 B 室 (郵編： 510665) 電話： (020)85524840 傳真： (02085528003， Email: 劉偉： tel(020)85524840 1057 MP:13570569160 Email: Data In 選擇要進行分類的數據。 2 Curve Analysis：雙擊 按鈕，進入曲線分析界面 Curve Name：輸入曲線的名稱 Data In：選擇曲線中 X、 Y 軸相對應的數值 Curve Fit： Curve Fit Method 選擇曲線類 型； X Axis Data 、 Y Axis Data： 選擇軸的線性關系 lin 或者 log； Extrapolation Factor：外推因子，對超出標準濃度的樣本進行推算 Data Out： Concentrations 定義計算值的名稱； Interpolations 在該對話框內。 Gene5 同時提供了多重公式計算的功能，如果你還需要對全部的樣品或部分樣品進行公式計算，則可以再次雙擊 按鈕，進行再一次的賦值計算，直到完成全部計算任務。如果公式適用于所有孔，則勾選 Use single formula for all wells， 則所有的孔都進行相應的公式計算；如果只對單獨的孔進行計算，則不需勾選 Use single formula for all wells，輸入公式后雙擊下方的 96 孔板示意圖中相應的孔，公式自動對相應孔進行計算。 Gene Company Limited 基因有限公司 17 廣州聯絡處 ：廣州市天河東郊工業(yè)園建工路 8 號 6 樓 B 室 (郵編： 510665) 電話： (020)85524840 傳真： (02085528003， Email: 劉偉： tel(020)85524840 1057 MP:13570569160 Email: 第三步：數據分析設置 雙擊 Data Reduction 下方的彩色圖標 進入數據分析設置界面，該界面為您提供 Transformation、 Well Analysis、 Curve Analysis、 Cutoff、 Validation、Polarization 幾個功能模塊可供選擇。 Incr：表示每點之間＋多少濃度 Fact：表示每點之 間 多少倍濃度 Gene Company Limited 基因有限公司 16 廣州聯絡處 ：廣州市天河東郊工業(yè)園建工路 8 號 6 樓 B 室 (郵編： 510665) 電話： (020)85524840 傳真： (02085528003， Email: 劉偉： tel(020)85524840 1057 MP:13570569160 Email: 布好的平板圖如下： 實驗不同酶標板的排布也不盡相同，實驗人員應按照實驗的需求對酶標板進行排布。 Filling： Horz or Vert 選擇不同樣本間的排列方式，橫排還是豎排。 Horz or Vert 選擇重復樣本的排列方式，橫排還是豎排。在下拉框中選擇想要定義的孔的類型，然后在下方空白的模式 96 孔板中進行點擊排布。 8 ：溫度設定，單擊 Set temperature 按鈕 Incubator off 溫度孵育關閉 Incubator on 溫度孵育打開，并設定時間，（并可選擇是否預熱） 9 ：酶標板的進出控制，單擊 Plate out/in 按鈕 ，根據需要選擇 酶標板彈出，顯示對話框（ ment 中填寫對話），酶標板彈入 酶標板彈出無對話框 酶標板彈入無對話框