【正文】 5 結(jié)論 在本次實(shí)驗(yàn)條件下，工藝Ⅱ制備雙黃連注射液的穩(wěn)定性較工藝Ⅰ制備的好，且適宜在避光冷藏貯存。雷濘菲等[18]用水提醇沉提取黃芩多達(dá)4次，同樣每次提取都有大量的雜質(zhì)生成。試驗(yàn)過程中，工藝Ⅰ和工藝Ⅱ制備的雙黃連注射液在80℃，90℃都出現(xiàn)了輕微的混濁。在經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)過程中，隨著試驗(yàn)溫度的升高和加熱時(shí)間的延長(zhǎng)，兩種工藝制備的雙黃連注射液的pH值都升高，這是由于隨著溫度的升高及加熱時(shí)間的延長(zhǎng)，注射液中綠原酸不同程度的分解而導(dǎo)致pH值的升高，同理論分析所得相一致。且工藝Ⅱ制備的雙黃連注射液中的黃芩苷相對(duì)含量較工藝Ⅰ在室溫下降少。 溫度對(duì)藥物穩(wěn)定性的影響 隨著溫度的升高，導(dǎo)致反應(yīng)的活化分子數(shù)明顯增加，從而加快反應(yīng)速度。光子的能量與波長(zhǎng)成反比，光線波長(zhǎng)越短，能量越大，故紫外線更易激發(fā)化學(xué)反應(yīng)，加速藥物的分解。雙黃連注射液在臨床應(yīng)用較多，因此研究它的穩(wěn)定性是必要的。藥物的穩(wěn)定性影響因素很多，如不同的環(huán)境因素、處方因素以及工藝因素等，因此穩(wěn)定性的研究不僅僅耗時(shí)，而且是一個(gè)難度較大的課題。表6：雙黃連注射液物理性質(zhì)變化結(jié)果Table 6: Changing result of physical character of Shuang Huang Lian InjectionT(℃)t(h)顏色工藝Ⅰ 工藝Ⅱ澄明度工藝Ⅰ 工藝ⅡpH值工藝Ⅰ 工藝Ⅱ60708090013579013579013579013579棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色棕紅色澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清輕微混濁輕微混濁澄清澄清輕微混濁輕微混濁輕微混濁輕微混濁澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清輕微混濁澄清澄清澄清輕微混濁輕微混濁輕微混濁4 分析與討論 穩(wěn)定性研究 藥物的穩(wěn)定性主要包括五個(gè)方面，即化學(xué)穩(wěn)定性、物理穩(wěn)定性、生物穩(wěn)定性、藥效學(xué)的穩(wěn)定性和毒理學(xué)穩(wěn)定性。表5：雙黃連注射液中黃芩苷的保存期Table 5: The shelf life of Baicalin in Shuang Huang Lian Injection工藝測(cè)定物質(zhì)回歸方程rK25 ℃ (1/h) (h)工藝I黃芩苷l(shuí)gK=103工藝Ⅱ黃芩苷l(shuí)gK=103 雙黃連注射液物理性質(zhì)變化 根據(jù)表6可知，在經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)中，隨著溫度的升高，注射液的顏色沒有變化，澄明度在80℃，90℃時(shí)有輕微的混濁，pH值隨溫度的升高逐漸升高。表4：黃芩苷的線性回歸方程及分解速度常數(shù)Table 4: Linearity equation and depound constant of Baicalin 制備工藝測(cè)定物質(zhì)T(℃)回歸方程rK(h1)LgK工藝Ⅰ黃芩苷60Lg(CⅠ%)=70Lg(CⅠ%)=80Lg(CⅠ%)=90Lg(CⅠ%)=工藝Ⅱ黃芩苷60Lg(CⅡ%)=70Lg(CⅡ%)=80Lg(CⅡ%)=90Lg(CⅡ%)= 黃芩苷的保存期()預(yù)測(cè) 根據(jù)Arrhenius 公式： 將表4中黃芩苷的lgK及其對(duì)應(yīng)的絕對(duì)溫度的倒數(shù)1/T進(jìn)行線性回歸，將T=+25代入方程，求得黃芩苷在25℃ 的反應(yīng)常數(shù)K25 ℃ ，= ℃ ， [11]。表3：黃芩苷含量變化結(jié)果 單位:(mg/ml)Table 3: Changing result of content of baicalin unit: (mg/ml)T(℃)t(h)工藝Ⅰ的黃芩苷含量變化 CⅠ CⅠ% Lg(CⅠ%)工藝Ⅱ的黃芩苷含量變化 CⅡ CⅡ% Lg(CⅡ%)60708090013579013579013579013579 確定反應(yīng)級(jí)數(shù) 依據(jù)表3中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，求出黃芩苷在不同溫度下Lg(C%)與t之間的回歸方程相關(guān)系數(shù)（r）及反應(yīng)速度常數(shù)（K）。表2 ：溫度對(duì)雙黃連注射液穩(wěn)定性的影響Table 2: Influence of Shuang Huang Lian Injection on the stability at the different temperature條件時(shí)間/d黃芩苷含量(mg/ml)黃芩苷的相對(duì)含量/%顏色澄明度pH值儲(chǔ)存前Ⅰ0棕紅色澄清儲(chǔ)存前Ⅱ0棕紅色澄清室溫Ⅰ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清冷藏Ⅰ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清室溫Ⅱ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清冷藏Ⅱ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn) 采用恒溫加速試驗(yàn)對(duì)兩種不同方法制備的雙黃連注射液中的黃芩苷含量進(jìn)行了考察，結(jié)果見表3和表6。因此，通過以上顏色反應(yīng)說明注射液中含有黃芩苷，結(jié)果如圖35：圖3：理化檢測(cè)結(jié)果: Detection result of physicochemical property對(duì)照工藝II工藝I圖4：紫外檢測(cè)結(jié)果對(duì)照: The testing result of UV 工藝II工藝I圖5：樣本氨氣熏蒸后紫外檢測(cè)結(jié)果: The result of UV light testing after samples smoked by ammonia gas 光照對(duì)雙黃連注射液穩(wěn)定性的影響 表1顯示，兩種不同制法制備的雙黃連注射液分別在自然光和避光條件下10d后，%，%，%%，外觀顏色幾乎沒有變化，pH值也普遍升高，說明雙黃連注射液對(duì)光不穩(wěn)定。102mg/ml之間呈良好的線性關(guān)系。3 試驗(yàn)結(jié)果 黃芩苷吸收波長(zhǎng)的確定 黃芩苷在250350nm的吸收波譜如圖1，黃芩苷在278nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇278nm為測(cè)定波長(zhǎng)。 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)，分別置于60℃，70℃，80℃，90℃避光恒溫水浴槽中加熱0，1，3，5，7，9h,取出立即冷卻,終止反應(yīng)，記錄雙黃連注射液的pH值，顏色，澄明度和黃芩苷含量[16]。①各8支5ml安瓿在室溫保存；②各8支5ml安瓿4℃保存[10]。將上述兩種樣品分別作記號(hào)后，分0d，3d，7d，10d時(shí)取兩支，混勻后測(cè)定pH值，顏色，澄明度和黃芩苷的含量[15]。 光照試驗(yàn)分別取兩種灌封好的雙黃連注射液。 黃芩苷理化性質(zhì)鑒定 取樣品1ml，加蒸餾水1ml，加5%三氯化鐵試液2滴，呈藍(lán)綠色。上述配制好的樣品溶液， mol/L鹽酸為空白液，測(cè)定其吸收度，并根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出黃芩苷的含量。以濃度為橫坐標(biāo)(X)，吸收度為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸[11]。 雙黃連注射液中黃芩苷的測(cè)定方法的建立 測(cè)定波長(zhǎng)的確定參照文獻(xiàn) [11] ，在250350nm波長(zhǎng)處測(cè)其紫外吸收。再濃縮至600ml加95%乙醇，使含醇量達(dá)60%。取黃芩提取物，加水適量，加熱并用40%，加入金銀花、連翹提取液，加水至1000ml，%活性炭，加入苯甲醇和吐溫80，冷卻，濾過，加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。 試驗(yàn)方法 雙黃連注射液的制備處方金銀花 250g黃芩 250g連翹 500g苯甲醇 10ml吐溫80 2ml加注射用水至 1000ml 參照文獻(xiàn)《中國(guó)中藥成方制劑》[9]規(guī)定工藝制備獸用雙黃連注射液Ⅰ制法：以上黃芩、金銀花和連翹中藥，黃芩酌予碎斷，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，分次濾過，合并濾液，濾液用鹽酸(2mol/L)，在80℃保溫30分鐘，靜置24小時(shí)，濾過，沉淀加8倍量水，攪拌，用40%，并加等量乙醇，攪拌使溶，濾過，濾液用鹽酸(2mol/L)，60℃保溫30分鐘，靜置12小時(shí)，濾過，,加10倍量水，攪拌，用40％，%活性炭，充分?jǐn)嚢瑁?0℃保溫30分鐘，加入1倍量乙醇攪拌均勻，立即濾過，濾液用鹽酸(2mol/L)，60℃保溫30分鐘，靜置12小時(shí)，濾過，沉淀用少量乙醇洗滌后，于60℃以下干燥。2 材料和方法 試驗(yàn)材料 雙波束紫外可見分光光度計(jì)（TU1901型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；恒溫水浴鍋（2004型，常州國(guó)華電器有限公司）；漩渦混合器 （XW80A型，上海青浦滬西儀器廠）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG9146型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；電子天平（MODL ESJ1204型，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；超低溫冷凍儲(chǔ)存箱（DWMW138型，中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE5298A型，上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)式多用真空泵（SHZ95型，河南鞏義市英峪予發(fā)儀器廠）；手提式壓力蒸汽滅菌器（，上海華絨醫(yī)用核子儀器有限公司）；酸度計(jì)