世界上最完善最詳細的神經(jīng)元原代培養(yǎng)完全黃金版(參考版)
2025-06-30 07:18本頁面
【正文】 。如果您買到的不是這個密度，請換算一下。對于一些雷到我的，我只能再次說，請收集足夠的背景文章在去選擇合適材料，please do it carefully and seriously!祝大家都能培養(yǎng)出健康漂亮的神經(jīng)元，歡迎大家來問問題（如果是美女的話，給個電話我會很開心）聲明，除了最后一幅圖是來自別的文獻，前面所有的經(jīng)驗都是我的原創(chuàng)，從無數(shù)失敗總結(jié)出的我認為最完美的神經(jīng)原代培養(yǎng)。硬套胎鼠的原代培養(yǎng)必然導致失敗。 大部分實驗都是用胎鼠，而新生鼠往往用來培養(yǎng)測一些LTD之類的（not quite sure,文獻太少），所以有人問我新生鼠的問題，我都是說你先看下背景文獻是不是你搞錯了。做原代培養(yǎng)的，首先就是收集大量背景文獻，看看你的相關要求的國際公認的做法是用哪種。成熟的神經(jīng)元10um的谷氨酸即可照成細胞凋亡，而谷氨酸受體46天就開始表達，如果胎鼠神經(jīng)元經(jīng)歷了mmol濃度的培養(yǎng)液中的谷氨酸還不被毒死，那就是怪事了。如果您不相信 neurobasal最好的而還是堅持用DMEM之類的培養(yǎng)液，麻煩檢查一下你們的DMEM或者MEM或者DMEMF12的invitrogen產(chǎn)品序列號，到網(wǎng)站上檢查下相應的組成公式。（德國隊的fans于凌晨）ugly分界線下面是對版面一些犯錯誤的研究方法中最嚴重的錯誤之一的提醒，請大家注意，我把回帖編輯到這里了。洗了之后吸干液體，換成neurbasal+B27+谷氨酰胺的神經(jīng)元專用無血清培養(yǎng)基。然后，注意：細胞請再用沒有加血清的，種板時候用的培養(yǎng)液清洗一次，也是要輕微搖晃，來進一步去除細胞碎片，從而得到良好的細胞生長環(huán)境。注意事項四：4小時后換液時，請輕輕搖晃板幾下再換。原因是：超過12小時，混在細胞懸液中的大量細胞碎片也會牢牢貼壁，而細胞碎片直接影響神經(jīng)元存活和正常代謝；另外12小時后，膠質(zhì)細胞會開始分裂，這時候就很難抑制了。嚴格來說這種事情直接實驗失敗。很多paper是1小時就換液，理由是膠質(zhì)細胞貼壁差，會除去。注意事項二（嚴格注意）種板后都是要搖晃板搖勻細胞，切記！千萬不能圈圈搖晃?。∪θu晃會導致神經(jīng)元都集中到培養(yǎng)板的孔中間，導致濃度不均，生長不均勻，會直接導致實驗失敗。所以種板時候有谷氨酸不會導致細胞毒性反應。馬血清會抑制神經(jīng)元凋亡并且抑制膠質(zhì)細胞生長（FBS也可以，但是太貴）種板注意事項一：種板時候的溶液推薦使用含有谷氨酸的培養(yǎng)液。注意一定要進口的。注意，注意?。∮捎谏窠?jīng)元的成熟速度和接種密度有很大關系，所以細胞計數(shù)一定要非常嚴肅認真！?。∫欢ㄒ懈褡佣伎矗?！如果發(fā)現(xiàn)計數(shù)板細胞不均勻，寧愿重新計數(shù)！?。∮捎诮佑|抑制現(xiàn)象，適當密度的神經(jīng)元可以抑制膠質(zhì)細胞生長，從而達到理想的實驗由于neurbasal培養(yǎng)液相當昂貴，所以種板時候是不用它的，而第一次換液才用。另外，高密度會導致細胞聚團，結(jié)果也是細胞不正常形態(tài)或者死亡，導致錯誤或失敗的實驗結(jié)果。密度過高也是很有害的。首先，神經(jīng)元互相接觸的幾率小，難以存活和成熟。記住的是，神經(jīng)元原代培養(yǎng)是細節(jié)決定成敗，任何一個環(huán)節(jié)沒處理好，整個實驗都會失敗。另外皮層和海馬濃度也稍微有差別。如果實驗者技術精湛，也可以不用這步，但是用這步會效果更好。而最上層最浮頭，則是細胞碎片。把你收獲的細胞懸液小心的加到稀釋好的梯度劑的上面一層，經(jīng)過1500轉(zhuǎn)（不是15
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