【正文】 。但我相信等待我們的必將是一片充滿機(jī)遇與風(fēng)險、歡樂與血淚交織的土地；也相信我們的未來必將如涅槃之鳳、浴火之凰；也更堅信，不朽的民族精神終將領(lǐng)導(dǎo)我們創(chuàng)造新的奇跡！風(fēng)雨不改凌云志，振衣濯足展襟懷。在這個美好的季節(jié)里，我在電腦上敲出最后一段話，心中涌現(xiàn)的不是想象已久的歡欣，卻是難以言喻的失落。再此感謝我們的學(xué)校南陽理工，感謝所有可敬可親的老師們，感謝我們班所有的同學(xué)，感謝所有信任我、幫助我的人，感謝你們，你們給我的情誼我會永遠(yuǎn)珍惜! 五月維夏，山有嘉卉。通過自己的學(xué)習(xí)與思考，我也基本形成了一套自己對人生的看法和追求。十年樹木，百年樹人。我可以很明確感受到學(xué)校在傳授知識的同時，對育人這一環(huán)節(jié)的相當(dāng)重視。在一個人漫長的生長過程中，需要的不僅僅是知識方面的積累，還需要正確的思想態(tài)度和積極樂觀的人生觀、價值觀、世界觀。大學(xué)期間，我所得到的不僅只是書本上的知識，大學(xué)里良好的環(huán)境氛圍也在潛移默化地影響著我的學(xué)習(xí)方式和思維模式。四年的大學(xué)生活是我人生這條線上的一小段，卻是最閃閃發(fā)光、值得回味的一段。感恩之情難以用語言量度，請允許我謹(jǐn)以最樸實的話語致以最崇高的敬意。還有許多不知名字的人，也許他們只是我生命中的匆匆過客，但他們對我的支持和幫助依然在我的心中留下了深刻的印象。同時，我也十分感謝和我一起做試驗的幾個同學(xué)，試驗過程中遇到了許多不懂的，我們相互討論也克服了不少困難。此外，我的試驗和論文最終能夠得以順利完成，也要感謝所有授我以業(yè)的大學(xué)老師。特別是她淵博的學(xué)識、深厚的學(xué)術(shù)素養(yǎng)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精神和一絲不茍、孜孜不倦的工作作風(fēng)時刻激勵著我努力踏實，并將鞭策我在未來的學(xué)習(xí)工作中銳意進(jìn)取、奮發(fā)向上，使我終生受益。在論文完成之際，我要特別感謝我的指導(dǎo)老師老師雖身負(fù)教學(xué)、科研重任，但仍百忙之中抽出時間，耳提面命，殷殷之情盡在諄諄教誨中。因此我們在實際生產(chǎn)和研究中有必要尋找各個操作參數(shù)的最佳條件，通過對各個操作因素進(jìn)行了合理的研究分析并進(jìn)行試驗設(shè)計以取得最大收益 。通過對各個操作因素進(jìn)行了合理的研究分析并進(jìn)行試驗設(shè)計，在單因素試驗和正交試驗之后，得出如下結(jié)論：在加酶量為 2022u/g，pH 值為 10，溫度 50℃，反應(yīng)時間 2h 的條件下，蛋白質(zhì)提取率可以達(dá)到最高 %。黃酒糟蛋白提取工藝研究144 結(jié)論本試驗在對多種植物蛋白提取方法進(jìn)行研究比較的基礎(chǔ)上，為了提高黃酒糟蛋白的提取率，先是采用了水洗除雜，然后纖維素酶酶解進(jìn)行原材料預(yù)處理，接著再進(jìn)行黃酒糟蛋白酶法提取工藝路線。在設(shè)定的反應(yīng)溫度和 pH 范圍內(nèi)，蛋白的提取率在反應(yīng)時間 2h 時最高，在此條件下其蛋白提取率為 ％。對于不顯著性因素反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間來說，可以綜合單因素及正交試驗的結(jié)果，堿性內(nèi)切蛋白酶的最適溫度應(yīng)該是在 50℃左右。本試驗的指標(biāo)是越大越好，即蛋白質(zhì)提取率也越高。通過比較 K 值大小，可以確定出各因素的優(yōu)水平是 A B C D 即：加酶量 2022u/g、pH 為 反應(yīng)溫度3150℃、反應(yīng)時間 2h。??3 根據(jù)上述分析，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，將采用 正交表進(jìn)行試驗，以蛋白??493L質(zhì)提取率為指標(biāo)，研究加酶量(A)、pH(B)、溫度(C)、時間(D)四因素對黃酒糟蛋白提取率的影響，以便得出其最優(yōu)化的因素水平組合。實際操作中，發(fā)現(xiàn)料液比過低時，反應(yīng)體系過稠難以攪拌混合，體系分散不均勻，所以料液比不能選擇太低。因此最適宜的料液比是 1:8。因為當(dāng)料液比過低時，反應(yīng)體系會比較黏稠，流動性差，黃酒糟不能很好地與蛋白酶結(jié)合，反應(yīng)不能充分進(jìn)行。因此，正交試驗中反應(yīng)時間定為 3h。這是因為蛋白質(zhì)水解是可逆反應(yīng)，積累的這些物質(zhì)會對酶解反應(yīng)有一定的抑制作用。 反應(yīng)時間對蛋白提取率的影響圖 5 反應(yīng)時間對蛋白質(zhì)提取率的影響由圖 5 可知，在反應(yīng)的前 3h，隨著時間的延長，蛋白質(zhì)的提取率穩(wěn)步上升；在 3h之后，蛋白提取率增長緩慢。原因可能是反應(yīng)溫度超過了其酶反應(yīng)的最適溫度，而導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生變性、降解反應(yīng)，降低了提取效率。??13 反應(yīng)溫度對蛋白提取率的影響黃酒糟蛋白提取工藝研究10圖 4 反應(yīng)溫度對蛋白質(zhì)提取率的影響由圖 4 可知，在 45~50℃的范圍內(nèi)，隨著溫度的上升，蛋白質(zhì)提取率有明顯的提高；當(dāng)溫度為 50℃時，蛋白提取率最高。 pH 對蛋白提取率的影響圖 3 pH 對蛋白質(zhì)提取率的影響 由圖 3 可知，當(dāng) pH 值小于 10 時，蛋白質(zhì)提取率隨 pH 值的增大而上升，pH 值在10 時，蛋白質(zhì)的提取率達(dá)到最大值，之后隨 pH 值的增大而減小。原因是在底物濃度不斷被酶完全飽和前，加酶量的增大提高了堿性蛋白酶對酒糟中蛋白的作用能力。 試驗結(jié)果分析 加酶量對蛋白提取率的影響黃酒糟蛋白提取工藝研究9圖 2 加酶量對蛋白質(zhì)提取率的影響 由圖 2 可知，當(dāng)加酶量從 500u/g 增至 2022u/g 時，蛋白提取率也隨之平穩(wěn)增長。故可以用該方法測量蛋白質(zhì)的含量。 總蛋白含量（%）= 氮含量100% 蛋白質(zhì)提取率（%）= %10?原 料 中 總 蛋 白 質(zhì) 質(zhì) 量加 入 的 蛋 白 酶 質(zhì) 量提 取 液 中 總 蛋 白 質(zhì) 量 正交試驗設(shè)計 鑒于各因素之間的相互影響，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取加酶量、pH 、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、料液比五個因素進(jìn)行正交試驗，以蛋白質(zhì)提取率為指標(biāo)，并對結(jié)果進(jìn)行方差分析，以獲得最佳提取工藝條件。然后再用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液進(jìn)行滴定，滴定所用無機(jī)酸的量相當(dāng)于被測樣品中的氨的量（滴定），根據(jù)所測黃酒糟蛋白提取工藝研究7得的氨量即可計算出樣品的氮含量。 原料中的總蛋白含量及蛋白提取率計算原料中的總蛋白含量使用微量凱氏定氮法測定，其原理如下：樣品與濃硫酸共熱，含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨（消化），氨又與硫酸作用，反應(yīng)生成硫酸銨。反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴中加熱 15min 進(jìn)行酶滅活處理，然后調(diào)整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 。按照2022u/g 的加酶量添加堿性內(nèi)切蛋白酶，水浴振蕩 2h，在反應(yīng)過程中不斷加堿，維持反應(yīng)液中 pH 在設(shè)定值 11177。用紫外分光光度??3法測定上清液的吸光值，進(jìn)而算得蛋白質(zhì)含量，最后計算蛋白提取率。 范圍內(nèi)。 （4）反應(yīng)時間對蛋白提取率的影響準(zhǔn)確稱取經(jīng)處理過的黃酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水，于 50℃的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調(diào)整 pH 值到 11(采用 1mol/L 的 NaOH 調(diào)整)。反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴中加熱15min 進(jìn)行酶滅活處理，然后調(diào)整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 。按照 2022u/g 的加酶量添加堿性內(nèi)切蛋白酶，在 40℃、 45℃、50℃、55℃的溫度下下水浴振蕩 2h，在反應(yīng)過程中不斷加酸或堿，維持反應(yīng)液中 pH 在設(shè)定值 11177。用紫外分光光度法測定上清液的吸光值，進(jìn)而算得??3蛋白質(zhì)含量，最后計算蛋白提取率。 范圍內(nèi)。黃酒糟蛋白提取工藝研究6 （2）pH 對蛋白提取率的影響準(zhǔn)確稱取經(jīng)處理過的黃酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水，于 50℃的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調(diào)整 pH 值為 112。反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴中加熱 15min 進(jìn)行酶滅活處理，然后調(diào)整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 。按照500u/g、1000u/g、1500u/g、2022u/g、2500u/g 的加酶量添加堿性內(nèi)切蛋白酶，水浴振蕩 2h，在反應(yīng)過程中不斷加酸或堿，維持反應(yīng)液中 pH 在設(shè)定值 11177。以蛋白質(zhì)濃度和對應(yīng)的吸光值為對應(yīng)坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確稱取 25mg 牛血清蛋白粉末，于小燒杯中溶解，搖勻后加入到 25mL 的容量瓶中，配置成 1mg/mL 的牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液配制的濃度為 。許多蛋白質(zhì)在一定濃度和一定波長下的光吸收值有文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可查，根據(jù)此光吸收值可以較準(zhǔn)確地計算蛋白質(zhì)濃度。該測定法具有簡單靈敏快速、高選擇性、干擾易消除、不??15消耗樣品，且穩(wěn)定性好、不干擾測定等優(yōu)點 。在最大吸收峰處，吸光度與蛋白質(zhì)的含量成正比，其關(guān)系服從朗伯比耳定律。 （2）工藝流程 準(zhǔn)確稱重 g 處理后的黃酒糟→加水→ 調(diào)整適當(dāng) pH 值和溫度→酶解→滅酶(100℃，15 min)→ 離心(4000r/min，10 min)→收集上清液→紫外分光光度法測定吸光值→根據(jù)吸光值計算蛋白質(zhì)含量。以 4000r/min 的速度離心 10min，棄上清液收集沉淀物。 之內(nèi)。準(zhǔn)確稱取 水洗除雜后的黃酒糟濕基，按照 1:8 的比例加水，在 50℃水浴鍋內(nèi)保溫，待錐形瓶內(nèi)料液溫度達(dá)到 50℃后，調(diào)整 pH 值到 5(采用 1mol/L 的 NaOH 來調(diào)整) 。 ? 纖維素酶水解經(jīng)過水洗之后，黃酒糟中還有一些粗纖維等不溶性物質(zhì)未能有效除去，只能通過酸法或酶法來降解。 試驗方法 原材料預(yù)處理及工藝流程