【正文】 整個(gè)畢業(yè)階段的學(xué)習(xí)使我受益終身，特在此向尹 老師表示深深的敬意和誠摯的感謝！另外感謝實(shí)驗(yàn)室的 鄭衛(wèi)紅 老師為我提供實(shí)驗(yàn)儀器及藥品，使實(shí)驗(yàn)得以順利進(jìn)行。隨著對(duì)其藥理作用及其機(jī)制以及結(jié)構(gòu)修飾的深入研究 , 將極大地促進(jìn)穿心蓮內(nèi)酯類新藥的研究和開發(fā)。提取分離方法多樣，有醇提法、水提法、 NaOH水溶液提取法、微波和超聲波輔助提取法。穿心蓮內(nèi)酯資源廣泛 , 在動(dòng)物體內(nèi)吸收快、藥效長、生物利用度高 , 且無明顯的毒副作用 , 與其他藥物配伍治療有更好的效果 , 可制成多種劑型，如穿心蓮內(nèi)酯膠囊、穿心蓮滴丸、穿心蓮內(nèi)湖州師范學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 15 酯分 散片、穿心蓮注射液等 具有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。 以前研究 [21,22]表明其所含成分 14脫氧穿心蓮內(nèi)酯 （ DA） 和 14脫氧 11,12 二去氫穿心蓮內(nèi)酯 （ DDA） 對(duì)麻醉大鼠有降壓作用 。穿心蓮中化學(xué)成分眾多，各個(gè)成分又有相對(duì)治療的病癥。 展望 穿心蓮是一味常用中藥，在我國分布廣泛?；钚蕴克r(shí)會(huì)吸附穿心蓮內(nèi)酯，造成一定的損失，因 此水浴時(shí)間不能太長。 ⑵ 通過單因素試驗(yàn)，考慮穿心蓮內(nèi)酯的性質(zhì)及穩(wěn)定性，選定了反應(yīng)溫度 60℃ 是提取穿心蓮內(nèi)酯的最佳溫度。 5 總結(jié)與展望 總結(jié) ⑴ 對(duì)穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液進(jìn)行最大吸收波長掃描，后得出穿心蓮內(nèi)酯的最大吸收波長在226nm 處，與參考文獻(xiàn) [17]比較后結(jié)果相同，所以選擇此波長為穿心蓮內(nèi)酯的測(cè)試波長。綜上所述， 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析，確定了 穿心蓮內(nèi)酯提取的最佳工藝條件為 A2B3C3D2， 即用乙酸乙酯為提取溶劑，且料液比為 1:30，在功率 140w、溫度 60℃時(shí)提取 60min。 不同溶劑是影響穿心蓮內(nèi)酯提取的最主要因素，達(dá)到極顯著水平，表中 k2k1 k3，因而選擇 D2； 超聲功率對(duì)穿心蓮內(nèi)酯的提取的也有較大影響極差，且 k3 k2 k1，故選擇 B3； 超聲振蕩時(shí)間的極差與超聲功率相近， R=，且 k2 k3 k1，故選擇 A3；料液比的極差很小，故這個(gè)因素是不顯著的次要因素，對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響也有，但程度不大。 正交 實(shí) 驗(yàn)結(jié)果討論 由表 47 可以看出四個(gè)因素的極差中 D的極差最大， B次之并且與 A 接近 ， C 的極差最小。由圖表可以看出，在溫度增大的同時(shí)，吸光度值也呈增大趨勢(shì)，在 55～ 60℃ 之間的斜率最大， 60～ 65℃ 時(shí)已經(jīng)趨向平穩(wěn)，再增大反應(yīng)溫度對(duì)提取率的影響不顯著。穿心蓮內(nèi)酯是 二萜內(nèi)酯類化合物 ，由相似相容原理可知，內(nèi)酯類易溶于有機(jī)溶劑，水是無機(jī)物，提取效果所以最差。提取液經(jīng)配制后測(cè)得吸光度見表 45 和圖 45?？紤]到節(jié)約能源方面，我們盡量不要采用太大的料液比。我們可以看出，圖中吸光度值一直是上升趨勢(shì)，在 1:30 時(shí)達(dá)到最高。此處通過改變 75%乙醇的是使用量來確定最佳的料液比。所以我們的結(jié)論是選擇的功率應(yīng)在 140w 以內(nèi)。 ⑵ 超聲功率不同 通過使用超聲功率分別為 80、 100、 1 1 160、 180w，其它條件相同，提取液抽濾后經(jīng)配制，測(cè)得不同吸光值。 通過圖 42和 表 42可以 看出 吸光值 是先按上升后又下降，中間一段趨于平穩(wěn)狀態(tài)，且當(dāng) 60min 和 80min 時(shí)吸光度非常接近。 表 47 正交試驗(yàn)方案與結(jié)果 試驗(yàn)號(hào) A(min) B(w) C D 吸光度 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 k1 k2 k3 R 主次 D B AC 優(yōu)組合 A2B3C3D2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按照穿心蓮內(nèi)酯的最佳提取工藝做了三組平行試驗(yàn)，得出如下數(shù)據(jù)。 以反應(yīng)溫度為單因素變量 表 46 不 同 反應(yīng)溫度對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響 反應(yīng)溫度 40℃ 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 65℃ 吸光值 (Abs) 圖 46 不同溫度對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響 湖州師范學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 12 由表格和圖片可知，溫度在 65℃時(shí)穿心蓮內(nèi)酯提取濃度最高，但是變化趨勢(shì)趨向平穩(wěn)，在5 60℃ 時(shí)幅度較大，溫度升高可以提高物質(zhì)的溶解度，分子運(yùn)動(dòng)越劇烈，物質(zhì)擴(kuò)散越快，相應(yīng)的提取速度也會(huì)加快，但溫度過高會(huì)使穿心蓮內(nèi)酯受熱分解，故提取的最佳溫度為 60℃。 以料液比為單因素變量 表 44 不同 料液比對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響 料液比 1:5 1:10 1:15 1:20 1:25 1:30 吸光值 (Abs) 圖 44 不同料液比對(duì)穿 心蓮內(nèi)酯提取的影響 由表格和圖片可知，料液比在 1: 1:2 1:30 時(shí)較高，且一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。 表 41 不同 濃度穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)液所得吸光度 濃度（ mg/ml) 吸光值 (Abs) 圖 41 穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 以超聲震蕩時(shí)間為單因素變量 表 42 不同 超聲振蕩時(shí)間對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響 時(shí)間（ time） 20min 40min 60min 80min 100min 120min 吸光值 (Abs) 湖州師范學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 9 圖 42 不同超聲振蕩時(shí)間對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響 由表格和圖片可知，超聲震蕩時(shí)間在 60、 80min 時(shí)穿心蓮內(nèi)酯提取濃度較高，在 40min時(shí)達(dá)到最高。穿心蓮內(nèi)酯與吸光度的回歸方程為 Y=， R2=。 ② 3,5 二硝基苯甲酸 堿液反應(yīng)（ Kedde,s reagent） 湖州師范學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 8 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，于比色板上，加乙醇 ，加 3,5二硝基苯甲酸 溶液 2滴，呈紫色。 ⑵ 薄層色譜： 吸附劑：硅膠 GCMC板 展開劑：氯仿 無水乙醇 （ 20:1） 顯色劑：碘蒸氣 結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯在常量下為一個(gè)斑點(diǎn)。 按照 中方法測(cè)定吸光度， 計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。以反應(yīng)溫度 45℃ 時(shí)，對(duì)超聲震蕩時(shí)間、超聲功率、料液比、提取溶劑這 4個(gè)因素進(jìn)行 3 水平 4 因素 L9(34)正交試驗(yàn)，所得濾液用 75%乙醇定容至 250mL，在最大吸收波長 226nm處測(cè)吸光度，找出穿心蓮內(nèi)酯提取的最佳工藝條件。 按照 中方法測(cè)定吸光度， 計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。 按照 中方法測(cè)定吸光度， 計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。 ⑷ 以不同溶劑為單因素變量 精確稱取 5g 穿心蓮粉 4 份，分別加入 250mL 錐形瓶，再依次加入水、 75%乙醇、乙酸乙酯、石油醚各 50mL， 設(shè)置超聲功率 100w，超聲溫度 40℃，然后放置于超聲波清洗器中震蕩 20min。震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性碳 30℃ 水浴 10min 脫色， 抽濾， 取濾液標(biāo)號(hào)，將所有濾液用 75%乙醇定容至 250mL。 按照 中方法測(cè)定吸光度， 計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。 ⑵ 以超聲功率為單因素變量 精確稱取 5g穿心蓮粉 6份，分別加入 250mL 錐形瓶，再各加入 50mL75%乙醇，設(shè)置反應(yīng)溫度為 40℃ ， 分別在 80、 100、 1 1 160、 180 瓦的功率下震蕩 20min。 ⑴ 以超聲震蕩時(shí)間為單因素變量 精確稱取 5g穿心蓮粉 6份，分別加入 250mL 錐形瓶，再各加入 50mL75%乙醇，置于超聲波清洗器中，設(shè)置溫度為 40℃，超聲功率 100W， 分別在 60、 80、 100、 120min 時(shí)取出，依次用真空抽濾， 再加入活性炭 ， 30℃ 水浴 10min 脫色，抽濾 ， 將濾液標(biāo)號(hào) 并 用 75%乙醇定容至 250mL。曲線以穿心蓮內(nèi)酯濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)。各加入 60%乙醇 2 mL， 1%3,5二硝基苯甲酸 2 mL， KOH 溶液 2mL，搖勻，靜置 15后以 60%乙醇定容至刻度，搖勻。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ⑴ 標(biāo)準(zhǔn)液的配備：精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（在 105℃ 下干燥至恒重） 20mg，加 95%乙醇完全溶解，轉(zhuǎn)移到容量瓶中并定容至 100mL，得到濃度為 。 圖 31 穿心蓮內(nèi)酯吸收光譜圖 ⑵ 此處采用比色法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯濃度。 實(shí)驗(yàn)步驟 含量測(cè)定方法 ⑴ 對(duì)穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液 (配制方法見 )進(jìn)行最大吸收波長掃描，后得出穿心蓮內(nèi)酯的最大吸收波長在 226nm 處， 與