【正文】 表 6 方差分析表變異來源 自由度 平方和 方差 F 值 αF顯著性A 2 ??.?， ※B 2 5.， ※C 2 D 2 誤差 e 2 從表 5 中可知，在試驗取值范圍內(nèi)，通過比較 值大小，可以得出四個因素對蛋Rj白質(zhì)提取率影響主次因素是：加酶量pH反應(yīng)溫度=反應(yīng)時間。老師作為一個優(yōu)秀負(fù)責(zé)、經(jīng)驗豐富的老師，無論是在論文的選題、構(gòu)思和材料的收集方面，還是在我試驗操作以及撰寫論文的過程中，都使我得到了她悉心的教誨和無私的幫助。知識可以不斷獲得，而人生觀一旦形成，對一個人的一生都有難以預(yù)料的影響。行方智圓煅內(nèi)蘊, 海闊天空鑄宏圖。因為它包含了太多的汗水和收獲、眼淚和歡笑，為我確立未來的人生方向起著至關(guān)重要的作用。 同時，各個因素對黃酒糟中蛋白質(zhì)提取率的影響是相互聯(lián)系、相互制約的，其影響規(guī)律在不同水平上相差較大，并呈非簡單的線性函數(shù)關(guān)系。 正交試驗 在影響蛋白質(zhì)提取率的五個單因素里面，料液比與蛋白提取率呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性，而且在料液比為 1:8 時幾乎達到了最大提取率。但是，當(dāng)酶濃度逐漸增長到底物濃度不能使其飽和時，酶解程度緩慢，提取率就不能再隨其成正比增長。 （5）料液比對蛋白提取率的影響 準(zhǔn)確稱取經(jīng)處理過的黃酒糟 ，按照 1:1:11:11:20 的料水比加水，于 50℃的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調(diào)整 pH 值到 11(采用 1mol/L 的 NaOH 調(diào)整) 。用紫外分光光度法測定上清液的吸光值，進而算得蛋白??3質(zhì)含量，最后計算蛋白提取率。 蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作由于酪氨酸、色氨酸殘基和苯丙氨酸所含有的苯環(huán)具有共軛雙鍵 ，使得蛋白質(zhì)??15分子具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收峰位于 280nm 附近（不同的蛋白質(zhì)吸收波長略有差別）。因此，綜上所述考慮到蛋白質(zhì)的提取效率和避免蛋白水解液的苦味性，本課題決定采用堿性蛋白酶研究黃酒糟蛋白的酶法提取工藝。傳統(tǒng)方法是以酸法提取為主，但由于酸法水解溫度較高，一般在 100℃以上。目前，黃酒糟因其年產(chǎn)量大、??10工業(yè)副產(chǎn)物多，以及營養(yǎng)豐富備受廣大國內(nèi)外研究者的關(guān)注。而在釀造黃酒的過程中，只是利用了原料中的糖分，絕大部分蛋白質(zhì)并沒有得到充分利用，最后遺留于黃酒糟中，因此可以說黃酒糟是一種豐富的蛋白質(zhì)資源。其釀造技術(shù)獨樹一幟，堪稱“天下一絕”，??1是祖國寶貴的科學(xué)文化遺產(chǎn)，成為東方釀造界的典型代表和楷模 。其中以浙江紹興??2黃酒為代表的麥曲稻米酒是黃酒歷史上最悠久、最有代表性的產(chǎn)品。經(jīng)過分級沉降的方法對黃酒糟蛋白進行了組成成分進行分析，可以得知谷蛋白和球蛋白是其中的主要組成部分 。在各類研究中利用黃酒糟來生產(chǎn)飼料、培養(yǎng)食用菌和進行厭氧發(fā)酵生產(chǎn)沼氣還是較深入和廣泛的，這不僅節(jié)約資源，而且還保護生態(tài)環(huán)境。原料中的碳水化合物易脫水，含硫氨基酸會分解產(chǎn)生含硫化合物，使產(chǎn)品具有一股臭味。 本課題的研究內(nèi)容 本課題是以黃酒糟為原料，研究黃酒糟蛋白的酶法提取工藝，旨在充分開發(fā)利用其中含量最大的水不溶性谷蛋白，提高蛋白質(zhì)的提取效率。在最大吸收峰處，吸光度與蛋白質(zhì)的含量成正比，其關(guān)系服從朗伯比耳定律。黃酒糟蛋白提取工藝研究6 （2）pH 對蛋白提取率的影響準(zhǔn)確稱取經(jīng)處理過的黃酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水，于 50℃的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調(diào)整 pH 值為 112。按照2022u/g 的加酶量添加堿性內(nèi)切蛋白酶，水浴振蕩 2h，在反應(yīng)過程中不斷加堿，維持反應(yīng)液中 pH 在設(shè)定值 11177。 pH 對蛋白提取率的影響圖 3 pH 對蛋白質(zhì)提取率的影響 由圖 3 可知，當(dāng) pH 值小于 10 時，蛋白質(zhì)提取率隨 pH 值的增大而上升，pH 值在10 時，蛋白質(zhì)的提取率達到最大值，之后隨 pH 值的增大而減小。實際操作中，發(fā)現(xiàn)料液比過低時，反應(yīng)體系過稠難以攪拌混合，體系分散不均勻，所以料液比不能選擇太低。因此我們在實際生產(chǎn)和研究中有必要尋找各個操作參數(shù)的最佳條件，通過對各個操作因素進行了合理的研究分析并進行試驗設(shè)計以取得最大收益 。大學(xué)期間，我所得到的不僅只是書本上的知識，大學(xué)里良好的環(huán)境氛圍也在潛移默化地影響著我的學(xué)習(xí)方式和思維模式。 。在一個人漫長的生長過程中，需要的不僅僅是知識方面的積累，還需要正確的思想態(tài)度和積極樂觀的人生觀、價值觀、世界觀。在論文完成之際，我要特別感謝我的指導(dǎo)老師老師雖身負(fù)教學(xué)、科研重任，但仍百忙之中抽出時間，耳提面命，殷殷之情盡在諄諄教誨中。??3 根據(jù)上述分析，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，將采用 正交表進行試驗，以蛋白??493L質(zhì)提取率為指標(biāo)，研究加酶量(A)、pH(B)、溫度(C)、時間(D)四因素對黃酒糟蛋白提取率的影響，以便得出其最優(yōu)化的因素水平組合。??13 反應(yīng)溫度對蛋白提取率的影響黃酒糟蛋白提取工藝研究10圖 4 反應(yīng)溫度對蛋白質(zhì)提取率的影響由圖 4 可知，在 45~50℃的范圍內(nèi)，隨著溫度的上升，蛋白質(zhì)提取率有明顯的提高；當(dāng)溫度為 50℃時，蛋白提取率最高。反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴中加熱 15min 進行酶滅活處理，然后調(diào)整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 。 范圍內(nèi)。該測定法具有簡單靈敏快速、高選擇性、干擾易消除、不??15消耗樣品，且穩(wěn)定性好、不干擾測定等優(yōu)點 。2 試驗材料與方法 試驗材料 試驗原料表 1 試驗原料原料名稱 采購時間 產(chǎn)地黃酒糟 2022 年 4 月 河南省南陽市 試驗試劑表 2 試驗所用主要試劑試劑 生產(chǎn)廠家（產(chǎn)地）纖維素酶 15000u/g堿性內(nèi)切蛋白酶 202200u/g混合指示劑濃硫酸上海撫生實業(yè)有限公司河南金源生物科技有限公司天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司天津致遠化學(xué)試劑有限公司過氧化氫 天津致遠化學(xué)試劑有限公司氫氧化鈉硫酸鉀天津市德恩化學(xué)試劑有限公司國藥集團化學(xué)試劑有限公司硼酸 北京化學(xué)試劑公司鹽酸 中平能化集團開封東大化工有限公司CuSO4堿溶酸沉法，是一種簡單易行的提取方法，比如在大豆蛋白等分離提取中就有著十分廣泛的應(yīng)用。開辟新的蛋白質(zhì)資源，增加飼用蛋白質(zhì)產(chǎn)量的問題迫在眉睫。雖然黃酒的生產(chǎn)已經(jīng)有幾千年的歷史，但是黃酒糟的研究卻始于八十年代末期。經(jīng)過蒸料，拌以麥曲、米曲或酒藥，進行糖化和發(fā)酵釀制而制成的釀造酒，享有“國酒”之美譽。 extraction rate of protein。其中氨基酸種類齊全，谷氨酸的含量最高，其次為亮氨酸和天冬氨酸。汪建國等人通過酸水解黃??8酒糟方式生產(chǎn)復(fù)合氨基酸 。同時，因為黃酒糟、白酒糟和啤酒糟中的組成含量也比較相似，這樣深入對黃酒糟蛋白的研究開發(fā)也就為其他酒糟的開發(fā)利用提供了可參考的重要依據(jù) 。堿性內(nèi)切蛋白酶對天然底物的專一性甚強，有終端疏水性氨基酸的專一性，主要裂解疏水性氨基酸的終端如：亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸等，而疏水性氨基酸在終端比在肽鏈間的苦味小 。最后干燥處理。 范圍內(nèi)。反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴中加熱 15min 進行酶滅活處理，然后調(diào)整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 。但當(dāng)加酶量大于 2022u/g 時，蛋白提取率增長趨勢減緩。當(dāng)料液比過高時則降低了酶的相對濃度，使其與底物碰撞的幾率大大降低。針對黃酒糟組織致密，粗纖維含量高的成分特點，使用堿性內(nèi)切蛋白酶通過酶水解植物蛋白將其中的蛋白分解成氨基酸和分子量較小但溶解性很好的的短肽而提取出來。黃酒糟蛋白提取工藝研究17光陰荏苒一揮間 ，厲兵秣馬又四年，生命中最美好的四年大學(xué)生活就這樣將近尾聲。沒錯，隨著論文的結(jié)束，也意味著我生命中最純美的學(xué)生時代即將結(jié)束，盡管百般不舍，但這一天終究會在熙熙攘攘的喧囂中毅然決然的來臨。它賦予了學(xué)習(xí)者更大的自主性和更廣闊的思維空間，同時也對學(xué)習(xí)者提出了更高的要求。畢竟“經(jīng)師易得，人師難求”，在此我要對老師再一次表示真摯地感謝和深深的敬意。從方差分析表 6 中可知，只有加酶量、pH 兩個因素在試驗設(shè)計水平上表現(xiàn)出顯著。因此該堿性內(nèi)切蛋白酶的最適反應(yīng)溫度是在 45~50℃之間。經(jīng)強堿堿化使之分解放出氨，用水蒸氣蒸餾法將氨蒸至無機酸溶液中（蒸餾）。 （3）反應(yīng)溫度對蛋白提取率的影響準(zhǔn)確稱取經(jīng)處理過的黃酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水，于 50℃的水浴鍋內(nèi)保溫，而后調(diào)整 pH 值到 11(采用 1mol/L 的 NaOH 調(diào)整)。若查不到待測蛋白質(zhì)的光吸收值，則可選用一種與待測蛋白質(zhì)的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行測定。 ? 水洗除雜準(zhǔn)確稱取 黃酒糟粉末，按 1:6 的比例加水，攪拌使黃酒糟粉末均勻分散于水中，在 60℃的溫度下水浴振蕩 30min，之后以 4000r/min 的速度離心