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有關人鼠嵌合抗體制備的可行性(參考版)

2025-06-25 14:20本頁面
  

【正文】 七、 時間及成本預算表1 時間預算項目時間(周)載體構建(外包,一次性)8雜交瘤細胞培養(yǎng)RNA提取與反轉錄引物合成1V區(qū)基因擴增與克隆2V區(qū)基因測序1插入表達載體及鑒定2表達載體擴增與抽提1轉染Sp2/0細胞與篩選3嵌合抗體檢測與篩選1總計(First Time)20表2 成本預算項目費用(元)感受態(tài)細胞TEasy Vector載體構建(外包)T4 DNA連接酶Taq DNA酶限制酶Trizol RNA提取試劑盒反轉錄PCR試劑盒,瓊脂糖,dNTPs,DNA MarkerDNA凝膠回收試劑盒質粒抽提試劑盒轉染試劑盒LipofectamineTM 2000,篩選劑MTX羊抗人IgG Fc片段HRP酶標抗體低溫高速臺式離心機水平式電泳儀PCR擴增儀紫外透射儀恒溫搖床引物合成測序其它耗材總計(First Time)。一只種植雜交瘤細胞的小鼠有時可產(chǎn)生多達10ml的腹水。以適量抗原包被酶標板,加細胞培養(yǎng)上清反應后,再加羊抗人IgG Fc片段HRP酶標抗體(經(jīng)鼠Ig吸附過)孵育,顯色后測A490吸光值。2周后將生長出的陽性克隆利用有限稀釋法單克隆化。設置空載體和無載體的細胞為對照。然后,分離純化相應的酶切片段,重復上述步驟,(抗原單詞的首字母)。然后與Nhe Ⅰ和Pme Ⅰ,(chimeric antibody, CA)。設計含酶切位點Apa Ⅰ的上游引物LLF,和含EcoR Ⅰ位點的下游引物LLR,以質粒pAcκCH3為模板,擴增出輕鏈信號肽基因片段;設計含EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位
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