醫(yī)學(xué)超級(jí)全核醫(yī)學(xué)第六章(參考版)
2025-05-31 01:34本頁(yè)面
【正文】 。 由于 IRMA中要分離的是游離抗體和抗原抗體復(fù)合物，都屬于大分子，非特異的分離方法很難奏效。 88 ?優(yōu)點(diǎn)：是非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng) ， 靈敏度明顯高于 RIA。 ? 加樣誤差：由于抗體是過(guò)量的，所以在 IRMA的加樣誤差主要來(lái)自抗原一個(gè)環(huán)節(jié)。但是要求有良好的分離方法的保證。 ? 反應(yīng)動(dòng)力學(xué)：非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，且抗體是過(guò)量的，反應(yīng)速度快，反應(yīng)容易達(dá)到平衡，溫度變化對(duì)結(jié)果影響不大。 84 反應(yīng)中的 NSB： 在 RIA主要影響高劑量反應(yīng)； 在 IRMA中主要影響低劑量反應(yīng)。 83 分離方法不同： IRMA需要 2個(gè)或 2個(gè)以上的抗原決定簇； RIA只需要一個(gè)抗原決定簇。用放射性核素標(biāo)記親和素，可以使這個(gè) IRMA系統(tǒng)的靈敏度大大提高。 一般第三抗體是由兔抗鼠 IgG的抗血清制成的，對(duì)于所有使用小鼠 IgG作為第二抗體的反應(yīng)系統(tǒng)都能形成抗原抗體復(fù)合物，又稱(chēng)為通用性標(biāo)記抗體。 79 80 標(biāo)記第三抗體法： 用雙抗夾心法中的第二抗體（標(biāo)記抗體）作為抗原免疫其他的動(dòng)物獲得的抗體為第三抗體。 78 IRMA的基本方法 根據(jù) IRMA的分離方法一般可以分為： 雙抗夾心法 :（最常用） 將分離抗體涂在反應(yīng)容器的壁上，稱(chēng)固相抗體。 ? 將放射性核素標(biāo)記在抗體上，用過(guò)量的抗體與抗原結(jié)合，反應(yīng)平衡后，用分離方法除去多余的抗體，測(cè)量抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性。 75 免疫放射分析 immunoradiometric assay, IRMA 76 *Ab + Ag*Ab + *Ab Ag （ B） （ F） 在體外條件下 , 利用 Ag與過(guò)量的 *Ab的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定放射性復(fù)合物的量來(lái)計(jì)算出 Ag 量的一種超微量分析技術(shù)。 4. 測(cè)量：測(cè)量游離或結(jié)合物部分的放射性 。 2. 孵育：根據(jù)不同的分析對(duì)象孵育的溫度和時(shí)間不同 ， 一般是 37℃ 。 74 （四）操作基本步驟 RIA的操作一般包括加樣、孵育、分離、測(cè)量和數(shù)據(jù)處理 5個(gè)部分。 73 （三）反應(yīng)的溫度和時(shí)間 ?溫度升高，抗原抗體結(jié)合的親和力要下降，溫度每升高 10℃ ，抗原抗體結(jié)合達(dá)到平衡的速度約提高一倍，達(dá)到平衡的時(shí)間縮短，反應(yīng)時(shí)間縮短。 ?：多功能的螯合劑，可以去除樣品中的鈣鎂離子。 離子強(qiáng)度： ～ 離子強(qiáng)度過(guò)高會(huì)抑制抗原抗體反應(yīng) ， 過(guò)低會(huì)降低緩沖能力 ，引起反應(yīng)系統(tǒng) PH值的變化 ， 同樣會(huì)影響抗原抗體反應(yīng) 。 71 （二）反應(yīng)介質(zhì)： 緩沖液： (pH值： ～ ) 緩沖液為 RIA提供一個(gè)適合的反應(yīng)環(huán)境 ， 是 RIA成敗的關(guān)鍵 。 ?缺點(diǎn)：反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，靈敏度較差 70 順序加樣法：先將非標(biāo)記抗原與抗體溫育反應(yīng)一定時(shí)間 （ 6～ 24小時(shí) ） ， 形成抗原抗體復(fù)合物后 ， 然后再加入標(biāo)記抗原短時(shí)間 （ 1～ 4小時(shí) ） 溫育后中止反應(yīng) 。 69 七、 RIA的方法學(xué) （一）反應(yīng)方式： 平衡加樣法：也稱(chēng)一步法，是將非標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗原和抗體同時(shí)加入反應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)。 穩(wěn)定性： 測(cè)量結(jié)果的穩(wěn)定性可以通過(guò)劑量反應(yīng)曲線(xiàn)的各個(gè)參數(shù)的穩(wěn)定性來(lái)間接反映。 68 特異性： 方法的特異性主要取決于抗體的特異性。 ? 確定靈敏度的方法主要有： ① 同一樣品 10次測(cè)量結(jié)果的 B/B0＝ 90％的劑量的平均值作為最小可測(cè)量。 ? 用反應(yīng)緩沖液將樣品稀釋成不同的劑量，繪制樣品稀釋曲線(xiàn)，如果樣品與標(biāo)準(zhǔn)品免疫活性相同，得到的曲線(xiàn)應(yīng)該是一組平行的曲線(xiàn)，所以又稱(chēng)為平行性實(shí)驗(yàn)。 一般的回收率的要求是 90％～ 110％。 ? 使用時(shí)將質(zhì)控樣品分置在待測(cè)樣品的不同位置中同時(shí)檢測(cè)。 ? 質(zhì)控樣品的濃度應(yīng)準(zhǔn)確定量并有合理的濃度范圍。 64 （ 1）質(zhì)量控制樣品 ? 質(zhì)量控制樣品是含有已知?jiǎng)┝看郎y(cè)物的血清樣本。 63 準(zhǔn)確度（ accuracy）： ? 是指測(cè)量值與真值的符合程度，其偏離真值的誤差就叫做偏差。 ? 主要反映隨機(jī)誤差的大小。 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的質(zhì)量控制側(cè)重于對(duì)檢測(cè)質(zhì)量的控制，保證從樣品 收集到發(fā)出結(jié)果報(bào)告的整個(gè)過(guò)程中能及時(shí)發(fā)現(xiàn)各種誤差，并分 析原因，找出糾正的方法。 3．改進(jìn)測(cè)定方法的設(shè)計(jì)以提高質(zhì)量。 具體作用有： 1．檢查誤差的程度，決定測(cè)定結(jié)果的取舍。 ?隨機(jī)誤差無(wú)法避免。 59 隨機(jī)誤差： ?是由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各種偶然因素造成同一樣品多次測(cè)定的結(jié)果不一致。 ?系統(tǒng)誤差引起的測(cè)定結(jié)果的偏差是固定的偏大或偏小。包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制（室內(nèi)質(zhì)控）和實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制（室間質(zhì)控）。 56 一個(gè)完善的質(zhì)量控制體系應(yīng)包括兩個(gè)環(huán)節(jié)： 生產(chǎn)廠(chǎng)家應(yīng)該建立嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)程序。 ? 但是，在實(shí)際工作中，這種理想的測(cè)定是不可能達(dá)到的。血清、血漿、體液、組織勻漿等樣品不加提純就可直接測(cè)量。 54 操作簡(jiǎn)便，商品化程度高： ? RIA所需試劑品種不多，便于制成配套試劑盒； ? 加樣程序簡(jiǎn)單 ,一次能分析大量標(biāo)本；
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