內(nèi)酰胺酶的分類及檢測(參考版)
2025-05-29 03:31本頁面
【正文】 10次 ? ? 4度 12,000轉(zhuǎn) rpm離心 20分鐘 4度 12,000rpm離心 20分 ? ? 取上清 ， 20度保存?zhèn)溆? 取上清液 ， 20度保存?zhèn)溆? ? 1． 測定方法 ? 0. 5麥氏單位濃度的大腸桿菌 ATCC25922 涂在 MH平皿上 ， 中心貼頭孢西丁紙片 （ 30） ? ? 切出 34個不同方向的狹縫 ， 鉤出其中的瓊脂 ? ? 每溝中加入待測菌的 40 的粗提物 ? ? 35度孵育過夜 ? ? 觀察結(jié)果 。 35度震搖 46h 種入 40ml大豆湯 。整合子： PCR產(chǎn)物序列測定。 質(zhì)粒： 。 ? β內(nèi)酰胺酶基因，分析基因結(jié)構(gòu)。 ?（ 4）基因分析： PCR產(chǎn)物測序。 b.等電聚焦電泳。 3．轉(zhuǎn)移性分析：分析酶編碼基因位于質(zhì)粒上還是染色體上； 在不在整合子中。 A B C 獲得性金屬酶 （ 1） IMP型金屬酶 （ 2） VIM型金屬酶 β內(nèi)酰胺酶的檢測 1．酶蛋白性質(zhì)分析：包括表型分析和酶動力學(xué)分析。 A類 β內(nèi)酰胺酶： 廣譜酶 2b組 A B A 大腸埃希菌 TEM1型酶結(jié)構(gòu) ； B 肺炎克雷伯菌的 SHV1型酶結(jié)構(gòu) 超廣譜 β內(nèi)酰胺酶 (2be) 經(jīng)典超廣譜 β內(nèi)酰胺酶 TEM型 ESBLs SHV型 ESBLs SHV2型 ESBLs 、 SHV5 型 ESBLs SHVΩ環(huán)突變型 ESBLs 其他超廣譜 β內(nèi)酰胺酶 CTXM型酶 可為分 4個小組 PER1及其相關(guān) ESBL PER 2 、 VEB 2 CME1 TLA1 特殊的非典型 ESBL SFO1 、 GES1 TEM型 ESBLs 1． Glu140→Lys 和 Glu240→Lys 替換 ：對頭孢他啶和氨曲南 耐藥 2． Arg164→Ser 或 His ：對頭孢他啶耐藥 ，對頭孢噻肟敏感 3． Gly238→Ser ：主要提高了對頭孢噻肟的水解能力（如 TEM19 ) SHV型 ESBLs 1. SHV2型 ESBLs： Gly238→Ser ，主要提高水解頭孢噻肟的能力 2. SHV5型 ESBLs ：同時具有 Gly238→Ser 和 Glu240→Lys 突變 3. SHVΩ環(huán)突變型 ESBLs： Asp179→Ala 、 Arg A類 β內(nèi)酰胺酶與 B類、 C類和 D類酶的同源性比較 B類 β內(nèi)酰胺酶 又稱金屬 β內(nèi)酰胺酶， Bush功能分類中屬于 3組酶，能滅活青霉素類、頭孢菌素類和碳青酶烯類抗生素，但對安曲南敏感；酶活性可被 EDTA抑制，但酶抑制劑克拉維酸和氯唑西林對它無作用 。 4組酶：是染色體介導(dǎo)的耐抑制劑的青霉素酶，對頭孢類抗生素的敏感性不定，對氨曲南和碳青霉烯敏感。β內(nèi)酰胺酶的分類及檢測 蔣曉飛 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心 ? 表 2 β內(nèi)酰胺酶的結(jié)構(gòu)和功能分類 分子結(jié)構(gòu) 功能 舉例 最適底物 抑制劑 (Ambler) (Bush) PEN CARB OX CR CTX ATM IPM CLAV CLOX EDTA 絲氨酸酶 A 2a PC1， LEN1 卅 十 － 土 － － － 卄 － － ? 2b SHV1,TEM1 卅 十 十 卄 － － － 卄 － － ? 2be K1,TEM3, 卅 十 十 卄 卄 卄 － 卄 － － ? SHV2,PER1 ? 2br TEM31 卅 十 十 十 － － － － － － ? 2C PSE1,BRO1 卄 卅 十
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1