基因的克隆方法大全(參考版)
2025-05-15 23:26本頁面
【正文】 42 思考題 ?請簡單闡述 SH在 mRNA水平上克隆差異表達(dá)基因的機(jī)理。 41 其它的基因克隆法 cDNA捕捉法 RNAi： RNA干涉法 酵母雙雜交法 。 ?大片段的基因組文庫（ BAC ， PAC ，TAC等）。 ?成功的例子： ?水稻 Xa21 ?擬南芥的 RPM1， RPS2等。 ?基因組的大小及可能存在的大量的重復(fù)序列。 ?基因序列測定及表達(dá)分析等。 目的基因 標(biāo)記 1 標(biāo)記 2 標(biāo)記 3 標(biāo)記 4 標(biāo)記 5 37 染色體 分子標(biāo)記 2 分子標(biāo)記 3 目的基因 基因組物理圖譜 進(jìn)一步精細(xì)定位 獲得目的基因 38 ?通過染色體步移或染色體登陸技術(shù)對目標(biāo)基因進(jìn)行進(jìn)一步精細(xì)定位，得到陽性克隆。 35 染色體 分子標(biāo)記 A 分子標(biāo)記 B 目的基因 陽性克隆 轉(zhuǎn)化互補(bǔ)實(shí)驗(yàn) 基因圖位克隆示意圖 36 圖位克隆基因的一般操作過程： ?通過遺傳分析構(gòu)建與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記連鎖圖，達(dá)到基因的精細(xì)定位。 適合擴(kuò)增真核生物基因。 32 提取基因組 DNA PCR引物設(shè)計(jì) 真核生物基因組含有內(nèi)含子！ 此法適合擴(kuò)增原核生物基因。 29 三、 基于基因序列的基因克隆方法 根據(jù)克隆的策略的不同，基于基因序列的基因克隆方法又可以分為兩種形式：通過分子雜交克隆法和通過 PCR擴(kuò)增基因法 30 通過分子雜交克隆法原理： 根據(jù)基因序列上的同源保守性，從一種生物中分離獲得的基因用于制作分子探針，從另一種生物的基因文庫中分離出此生物中的同源基因。 ?用 Ds做 probe篩選突變體文庫獲得突變基因的部分序列。 ?應(yīng)用：以 Ac/Ds系統(tǒng)為例 28 Ac/Ds系統(tǒng)操作原理 ?把 Ac， Ds分別轉(zhuǎn)化并獲得轉(zhuǎn)化體。 ?結(jié)構(gòu)共同點(diǎn)： ?兩端含有 2040個(gè)核苷酸的倒置重復(fù)序列。 27 ?轉(zhuǎn)座子根據(jù)結(jié)構(gòu)不同可以分為簡單轉(zhuǎn)座子和復(fù)雜轉(zhuǎn)座子 ?簡單轉(zhuǎn)座子：可以直接插入到其他位置 ,也叫插入序列。 26
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