【正文】 基本方法 大鼠小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)、 Western blot、RT－ PCR、鈣磷沉淀法轉(zhuǎn)染基因、轉(zhuǎn)基因神經(jīng)元的凋亡分析、報(bào)道基因表達(dá)分析、免疫沉淀等基本方法均按我們報(bào)道 [1, 2, 3, 4, 5, 6]的進(jìn)行。腺病毒的活性高低是決定能否對(duì) CGNs達(dá)到 70－ 80％感染率的關(guān)鍵，而正確的腺病毒保存條件又是其活性高低的決定因素。因此，dnSP1的腺病毒載體 AddnSP1的構(gòu)建是采用 RT－ PCR和 Western blot分析 bim的 mRNA和蛋白質(zhì)的前提。 負(fù)顯性 SP1腺病毒 (AddnSP1)載體 的構(gòu)建、擴(kuò)增、純化和保存 為了達(dá)到在 mRNA 和蛋白質(zhì)水平（而不僅僅是人工的報(bào)道基因水平）觀(guān)察 dnSP1是否能夠抑制撤鉀誘導(dǎo) bim基因的上調(diào)的目的，必須保證 dnSP1導(dǎo)入 CGNs有較高的導(dǎo)入率。 課 題 組 成 員 交流與合作 ： 我們與國(guó)際同行建立了良好的交流渠道， 與毛子旭(Zixu Mao, Associate Professor， Brown University， 現(xiàn)在Emory University)、韓怡凡 (Yifan Han, Associate Professor，Hong Kong University of Science and Technology)一直保持密切合作關(guān)系，我們已經(jīng)共同發(fā)表了多篇 SCI論文（見(jiàn)工作基礎(chǔ)中的參考文獻(xiàn)），在人員、信息、試劑和載體等多方面真正做到了互通和互惠。這些研究工作改變了以往的觀(guān)點(diǎn) ,也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。 我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí) JNK/cJun不參與 bim的上調(diào) [1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了 PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo) bim的上調(diào) (未發(fā)表資料 )。研究方向主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控。 工作基礎(chǔ) ： 本項(xiàng)目是在原工作基礎(chǔ)上的繼續(xù)和深入。但是， Dr. Ham讀了我們的文章初稿之后，在提出中肯意見(jiàn)的同時(shí)，稱(chēng)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果非常清楚并對(duì)我們的上述結(jié)論表示認(rèn)同 (Overall your results are clear and suggest that altering the KCl concentration in CGNs induces the bim promoter by a mechanism that does not involve JNK / cJun or FOXO factors)。 . of three experiments. 參 考 文 獻(xiàn) 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu,Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li. Activity deprivationdependent induction of the proapoptotic BH3only protein Bim is independent of JNK/cJun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2022, 375： 7－ 12. 2. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinson’s disease. Neurosci Res 2022； 48:195202 實(shí)事求是、追求真理的人文精神 Dr. Jonathan Ham以撤 NGF的交感神經(jīng)元為模型觀(guān)察到JNK/cJun[10]和 PI3K/Akt/ FKHRL1通路參與 Bim的上調(diào) [12]，而我們以撤鉀處理 CGNs為模型觀(guān)察到，這兩條通路不參與Bim的上調(diào)。 10mg/kg (d) and 30mg/kg (e). Note Indirubin339。 MPTP along with Indirubin339。oxime prevented loss of dopamine neurons after MPTP administration. (a) vehicle treated (control)。 indirubin339。276(1):25160 靛玉紅直接抑制 JNK活性 靛玉紅直接抑制 JNK, 保護(hù)神經(jīng)元 Indirubin339。 5. This is a nicely writen proposal with a clear aim and practical approaches. Further, the group has published results related to the current proposal, indicating the ability of the group to perform the experiments. 獲得資助的決定因素 ? 工作基礎(chǔ)好 ? 學(xué)術(shù)創(chuàng)新性及學(xué)術(shù)價(jià)值 ? 立項(xiàng)依據(jù)充分 ? 研究?jī)?nèi)容明確 ? 技術(shù)路線(xiàn)清晰 ? 重點(diǎn)突出、方案合理 ? 國(guó)際合作 祝大家新年快樂(lè)！ 在新的一年獲得更多基金！ 基金答辯 ? 充滿(mǎn)自信、激情 ? 儀表和體語(yǔ) ? 特點(diǎn)： 專(zhuān)家心理？按提前結(jié)束做準(zhǔn)備！ ? 準(zhǔn)備充分 幻燈 小道具 ? 口頭表達(dá) 準(zhǔn)確性、情感性、可信性和簡(jiǎn)明性 ? 開(kāi)門(mén)見(jiàn)山、突出主題 做什么？為什么？怎樣做？ ? 突出特色和創(chuàng)新 帕金森病治療的新靶點(diǎn)及靛玉紅衍生物的研究與開(kāi)發(fā) 黎 明 濤 中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 立論依據(jù) 現(xiàn) 狀： ： 世界性；中國(guó) 100萬(wàn)；美國(guó) 100萬(wàn) ： 黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡 紋狀體多巴胺含量 ： 左旋多巴 — 對(duì)癥治療：療效不理想、安全性受 到質(zhì)疑 以 JNK為新靶點(diǎn)治療 PD 2022年省重點(diǎn)項(xiàng)目（ 15萬(wàn)元）資助 MLK ↓ JNK SP600125 ↓ cJun ↓ 凋亡 以 JNK為靶治療 PD 1. 保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元 2. 改善行為學(xué)指標(biāo) 3. 提高黑質(zhì)多巴胺濃度 結(jié)題情況 1. 四篇 SCI文章， 通訊作者 2. 人才培養(yǎng)： 1名 博士 2名 碩士 以 JNK/CDK5/GSK3β為靶治療 PD JNK Neurosci Res 2022, 48:195202 Drug News 17(10):64654 GSK3β Mingtao Li, et al, unpublished data CDK5 PNAS USA 2022,100(23):136505 抑制 JNK/CDK5/GSK3β的方案 ，“一石三鳥(niǎo)” Indirubin339。理由：該項(xiàng)目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀