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微生物菌種選育ppt課件(參考版)

2025-05-06 23:19本頁面
  

【正文】 菌種保藏的原理是什么?常見的軍種保藏方法有哪些? 菌種退化的原因有哪些?簡述防止菌種退化的措施。 ?復壯措施: ? 對已衰退菌種配合一定培養(yǎng)條件進行單細胞分離純化 ? 淘汰衰退的個體 ? 選擇合適的培養(yǎng)基 思考題 名詞解釋 多因素低劑量的誘變效應(yīng)、互變異構(gòu)效應(yīng)、染色體畸變、基因突變、表型延遲、營養(yǎng)缺陷型、雜交育種、原生質(zhì)體融合、原生質(zhì)體再生、菌種的擴培、接種量、菌種退化、菌種復壯 采集土壤微生物樣品時應(yīng)該注意哪些問題? 什么是增殖培養(yǎng)?為什么要進行增殖培養(yǎng)? 土壤中分離純化微生物的方法有哪些?請簡述之。 四、菌種的衰退與復壯 菌種衰退 菌種經(jīng)過長期人工培養(yǎng)或保藏,由于自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。 ( 4)重新培養(yǎng) 當要使用或檢查所保存的菌種時,可將安瓿管從冰箱中取出,室溫或 35- 40℃ 水浴中迅速解凍 ,當 升溫至 0℃ 時即可打開安瓿管 ,將菌種移到適宜的培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)。 由于液氮要蒸發(fā) , 這樣溫度就會上升 , 冰晶狀態(tài)發(fā)生變化 , 從而導致菌種死亡 。 這樣在細胞 接觸低溫前 , 使細胞內(nèi)自由水通過膜滲出而不使其遇冷形成冰晶而傷害細胞 。用保護劑制備好菌液后,加入準備好的安瓶管中,一般安瓿管的裝量為- 1mL。 ( 2) 菌種準備及分裝 因為液氮法菌種要經(jīng)受 超低溫的冷凍過程 。這是因為液氮的溫度可達 一 196℃ ,遠遠低于其 新陳代謝作用停止的溫度(一 130℃ ) ,所以此時菌種的 代謝活動已停止 , 化學作用亦隨之消失 。 其保存期最長 。 E 液氮超低溫保藏法 ( 細菌 , 真菌 ) 液氮超低溫保臧法足近幾年才發(fā)展起來的 , 此法國外已較普遍采用 , 是適用范圍最廣的微生物保藏法 。 保護劑的作用可能是在冷凍干燥的 脫水過程中代替結(jié)合水而穩(wěn)定細胞成分(細胞膜)的構(gòu)型 , 防此細胞膜因為凍結(jié)而破壞 。 這種方法的 基本操作 過程是先將微生物 制成懸浮液 , 再 與保護劑混合 ,然后放在特制的安瓶管內(nèi),用低溫酒精或干冰,使其迅速凍結(jié),在 低溫下用真空泵抽干 ,最后將安瓿管真空熔封,并低溫保藏。這種保藏方法雖然需要一定的設(shè)備,要求亦比較嚴格,但由于該方法保藏效果好,對各種微生物都適用。在這樣的環(huán)境中,微生物的生長和代謝都暫時停止,不易發(fā)生變異。 D真空冷凍干燥保藏法 ( 細菌 , 防線菌 ) 真空冷凍干燥保藏法 是目前常用的較理想的一種方法。 其次 , 將斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或?qū)⑿泵骀咦庸蜗?直接與沙土混合 , 于干燥器中用真空泵抽干 , 放在冰箱內(nèi)保存 。 C間歇滅菌三次 , 滅菌試驗合格后烘干備用 。適合于 產(chǎn)孢子或芽孢 的微生物。 保存期約一年左右。 B 石蠟油封存法(酵母) 向培養(yǎng)成熟的菌種斜面上,倒入一層滅過菌的石蠟油,用量要 高出斜面一厘米 ,然后保存在冰箱中。 菌種保藏的方法很多 , 一般有下面幾種 : A 斜面冰箱保藏法 ( 酵母 ) 斜面保藏是一種短期 、 過渡的保藏方法 , 用新鮮斜面接種后 , 置最適條件下培養(yǎng)到菌體或孢子生長豐滿后 , 放在 4℃ 冰箱保存 。一般可通過保持培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在最低水平缺氧狀態(tài),干燥和低溫,使菌種處于“體眠”狀態(tài),抑制其繁殖能力。其任務(wù)首先是使菌種不致死亡,同時還要盡可能設(shè)法把菌種的優(yōu)良特性保持下來而不致向壞的方面轉(zhuǎn)化。 五、種子異常分析 ?菌種生長速度,過快或過慢 ?菌絲結(jié)團 ?菌絲粘壁 第四節(jié) 菌種的保藏與復壯 一、菌種保藏的意義 菌種是從事微生物學以及生命科學研究的基本材料,特別是利用微生物進行有關(guān)生產(chǎn)如抗生素、氨基酸、釀造等工業(yè),更離不開菌種。 產(chǎn)物生成量 ?在抗生素發(fā)酵中,產(chǎn)物生成量是考察種子質(zhì)量的重要指標,因為種子液中產(chǎn)物生成量的多少間接反映種子的生產(chǎn)能力和成熟程度。 ? 菌種穩(wěn)定性的檢查 ? 無雜菌檢查 四、種子質(zhì)量標準 形態(tài) ?單細胞:菌體健壯、菌形一致、均勻整齊,有的還要求有一定的排列或形態(tài); ?霉菌、放線菌:菌絲粗壯、對某些染料著色力強、生長旺盛、菌絲分枝情況和內(nèi)含物情況好。 ? 通常接種量,細菌 1~5%,酵母菌 5~10%,霉菌 7~15%,有時 20~25% 三、種子質(zhì)量的控制措施 ?種子質(zhì)量的最終指標是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來的生產(chǎn)能力。但接種量過大或者過小,均會影響發(fā)酵。Ru 嗜堿性芽孢桿菌生產(chǎn)堿性蛋白酶, 12小時最好。時間太長,菌種趨于老化,生產(chǎn)能力下降,菌體自溶;種齡太短,造成發(fā)酵前期生長緩慢。 培養(yǎng)條件 ( 1)溫度 ( 2)通氣量 ( 3) pH 種齡 ? 種齡:是指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。 接種量 ?接種量大小影響到培養(yǎng)基中孢子的數(shù)量,進而影響菌體的生理狀況。 ? 冷藏時間對孢子的生產(chǎn)能力也有影響。如土霉素生產(chǎn)菌種孢子斜面培養(yǎng) 4天左右即于 4?C冰箱保存,發(fā)現(xiàn)冷藏 7~8天菌體細胞開始自溶。 ?措施:孢子培養(yǎng)的時間應(yīng)該控制在 孢子量多、孢子成熟、發(fā)酵產(chǎn)量正常 的階段終止培養(yǎng)。 培養(yǎng)時間和冷藏時間 ( 1)培養(yǎng)時間 ?一般來說, 衰老的孢子不如年輕的孢子 ,因為衰老的孢子已在逐步進入發(fā)芽階段,核物質(zhì)趨于分化狀態(tài)。在氣溫高含濕度大的地區(qū),斜面孢子長得慢, 主要由于試管下部冷凝水多而不利于孢子的形成。 ( 2)濕度 制備斜面孢子培養(yǎng)基的濕度對孢子的數(shù)量和質(zhì)量有較大的影響。如土霉素生產(chǎn)菌種在高于 37?C培養(yǎng)時,孢子接入發(fā)酵罐后出現(xiàn)糖代謝變慢,氨基氮回升提前,菌絲過早自溶,效價降低等現(xiàn)象。 ?菌種在固體培養(yǎng)基上可呈現(xiàn)多種不同代謝類型的菌落,氮源品種越多,出現(xiàn)的菌落類型也越多,不利于生產(chǎn)的穩(wěn)定。磷含量太多或太少也會影響孢子的質(zhì)量。 ? 蛋白胨加工原料不同如魚胨或骨胨對孢子影響也不同。 種子質(zhì)量的控制 一、影響孢子質(zhì)量的因素及控制 ?培養(yǎng)基 ?培養(yǎng)條件 ?培養(yǎng)時間和冷藏時間 培養(yǎng)基 ? 生產(chǎn)過程中經(jīng)常出現(xiàn)種子質(zhì)量不穩(wěn)定的現(xiàn)象,其主要原因是原材料質(zhì)量波動。但也與所選用工藝條件有關(guān)。 茄子瓶 → 種子罐 → 發(fā)酵罐 ? 霉菌:生長較慢 , 如青霉菌 , 三級發(fā)酵 孢子懸浮液 → 一級種子罐 ( 27?C,40小時孢子發(fā)芽 , 產(chǎn)生菌絲 ) → 二級種子罐( 27?C,10~24小時 , 菌體迅速繁殖 , 粗壯菌絲體 ) → 發(fā)酵罐 ? 放線菌:生長更慢 , 采用四級發(fā)酵 ? 酵母:比細菌慢 , 比霉菌 , 放線菌快 ,通常用一級種子 ( 二級發(fā)酵 ) 。 ? 種子罐級數(shù)取決于: ? 菌種生長特性(如菌種傳代后的穩(wěn)定性)、孢子發(fā)芽及菌體繁殖速度; ? 所采用發(fā)酵罐的容積 ? 另外還與發(fā)酵罐中種子培養(yǎng)液的最低 接種量(種子液體積 /培養(yǎng)液體積) 以及種子罐與發(fā)酵罐的容積比等有關(guān)。 種子罐的作用 ?主要是使孢子發(fā)芽,生長繁殖成菌(絲)體,接入發(fā)酵罐能迅速生長,達到一定的菌體量,
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