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組織培養(yǎng)ppt課件(參考版)

2025-05-06 03:38本頁面
  

【正文】 對(duì)于移栽后成活比較困難的植物,第一次移栽時(shí)最好選用滅菌過的基質(zhì),以提高其移栽成活率。開始幾天最好用燒杯罩住移栽苗,使其周圍的相對(duì)濕度保持在 85%以上。做好適當(dāng)遮蔭工作,避免太陽光直射,造成試管苗迅速失水而死亡。但活性炭對(duì)有些月季品種的促根生長無反應(yīng)。 ( 3) 無機(jī)鹽濃度 試驗(yàn)結(jié)果表明 , 降低無機(jī)鹽的濃度對(duì)植物生根效果較好 , 有利于移栽成功 。 細(xì)胞分裂素一般會(huì)抑制根的生長 , 不利于移栽 。 但是 , 不同的植物有其適宜的生長素種類 。同一種植物的試管苗,其壯苗比弱苗移栽后成活率高(如表 41)。 總的來說,提高試管苗移栽成活率的途徑有以下幾種。 據(jù)王連清等人對(duì)棉花的試管苗進(jìn)行嫁接移栽的有關(guān)試驗(yàn)表明,試管苗的嫁接移栽法與常規(guī)移栽法相比具有許多優(yōu)點(diǎn),其最主要的有以下幾點(diǎn): 表 41 嫁接移栽法移栽棉花試管苗的效果 試管苗 種類 移栽方法 移栽 植株數(shù) 成活 植株數(shù) 成活率( %) 嫁接移栽法 35 33 壯苗 常規(guī)移栽法 50 24 直接移栽法 21 0 嫁接移栽法 30 21 弱苗 常規(guī)移栽法 27 2 直接移栽法 15 0 影響試管苗移栽成活率的因素 影響試管苗移栽成活率的因素有許多種,包括內(nèi)因與外因。 ( 2)直接移栽法 直接移栽法是指直接將試管苗移栽到盆缽的方法。移栽的方法有:常規(guī)移栽法、直接移栽法和嫁接移栽法。馴化一般進(jìn)行 1~ 2周。 馴化的 原則 :應(yīng)從溫度、濕度、光照及有無菌態(tài)等環(huán)境要素進(jìn)行,馴化開始數(shù)天內(nèi),應(yīng)和培養(yǎng)時(shí)的環(huán)境條件相似;馴化后期,則要與預(yù)計(jì)的栽培條件相似,從而達(dá)到逐步適應(yīng)的目的。 試管苗的特點(diǎn) 試管苗與常規(guī)苗相比具有如下 特點(diǎn) : 第 1,試管苗生長細(xì)弱,莖、葉表面角質(zhì)層不發(fā)達(dá); 第 2,試管苗莖、葉雖呈綠色,但葉綠體的光合作用功能較差; 第 3,試管苗的葉片氣孔數(shù)目少,活性差; 第 4,試管苗根的吸收功能弱。另外,試管苗還處在一種特殊的氣體環(huán)境中。在移栽過程中試管苗要經(jīng)歷由無菌向有菌的轉(zhuǎn)換。 ( 4)無菌 試管苗所在環(huán)境的另一大特點(diǎn)是無菌??梢娕囵B(yǎng)瓶內(nèi)的水分狀態(tài)直接影響著試管苗的生長和各種生理活性。 ( 2)高濕 植物組織培養(yǎng)中試管或培養(yǎng)瓶內(nèi)的水分移動(dòng)有 2條途徑,一是試管苗吸收的水分,從葉面氣孔蒸騰;二是培養(yǎng)基向外蒸發(fā),而后水汽凝結(jié)又進(jìn)入培養(yǎng)基。 2 ℃ ,有的植物需將溫度控制得更高;而外界環(huán)境條件,溫度處于不斷變化之中,溫度的調(diào)節(jié)完全是由自然界太陽輻射的日輻射量決定的,溫差很大,而且一般不會(huì)達(dá)到 25 ℃ 177。這個(gè)生態(tài)系統(tǒng)與外界環(huán)境條件相比具有以下 4大差異,即高溫、高濕、弱光和無菌。 七、試管苗的馴化與移栽 試管苗生長的特點(diǎn) 1)試管苗的生態(tài)環(huán)境 組織培養(yǎng)中培育出來的苗通常稱試管苗或組培苗。 體細(xì)胞無性系變異 體細(xì)胞無性系變異( somaclonal variation)可能的原因: 從細(xì)胞水平上發(fā)現(xiàn),體細(xì)胞培養(yǎng)的植株染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,引起基因 重排,產(chǎn)生多倍體和非整倍體。 例如: 六、繼代培養(yǎng) 繼代培養(yǎng)( subculture) : 組織培養(yǎng)中,培養(yǎng)物培養(yǎng)一段時(shí)間后,為了防止培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)老化,或培養(yǎng)基養(yǎng)分利用完而造成營養(yǎng)不良及代謝物過多積累毒害等的影響,將其及時(shí)轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中的過程就是~ 繼代培養(yǎng)時(shí)間的長短因植物材料不同、培養(yǎng)方法和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌煌? ( 7)在培養(yǎng)基中添加其它物質(zhì) 在培養(yǎng)基中加入間苯三酚或根皮苷或其它添加物,可有效地減輕或防治試管苗玻璃化。如用 400C熱擊處理瑞香愈傷組織培養(yǎng)物可完全消除其再生苗的玻璃化,同時(shí)還能提高愈傷組織芽的分化頻率。如果培養(yǎng)室的溫度過低,應(yīng)采取增溫措施。光照時(shí)間不宜太長,大多數(shù)植物以8h ~ 12h為宜;光照強(qiáng)度在 1000lx~ 1800lx之間,就此可以滿足植物生長的要求。 ( 4)增加自然光照,控制光照時(shí)間 在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),玻璃苗放在自然光下幾天后莖、葉變紅,玻璃化逐漸消失。 ( 3) 適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度 細(xì)胞分裂素和赤霉素可以促進(jìn)芽的分化 ,但是為了防止玻璃化現(xiàn)象 , 應(yīng)適當(dāng)減少其用量 , 或增加生長素的比例 。適當(dāng)增加培養(yǎng)基中鈣、鋅、錳、鉀、鐵、銅、鎂的含量,降低氮和氯元素比例,特別是降低銨態(tài)氮濃度,提高硝態(tài)氮濃度,可減少玻璃化苗的比例。如果培養(yǎng)基中離子種類及其比例不適宜該種植物,玻璃化苗的比例就會(huì)增加。 ( 6)離子水平 植物生長需要一定的礦物質(zhì)營養(yǎng),但是,如果營養(yǎng)離子之間失去平衡,試管苗生長就會(huì)受到影響。在一定容量的培養(yǎng)瓶內(nèi),愈傷組織和試管苗生長越快,越容易形成玻璃化苗。大多數(shù)植物在 10h~ 12h光照下都能生長良好,光照時(shí)數(shù)大于 15h時(shí),玻璃化苗的比例明顯增加。溫度高時(shí)玻璃化苗減少,且發(fā)生的時(shí)間較晚。因此,瓊脂的濃度一定要適當(dāng)。 ( 2)瓊脂濃度 培養(yǎng)基中瓊脂濃度低時(shí)玻璃化苗比例增加,水浸狀嚴(yán)重,苗向上長。產(chǎn)生玻璃化苗的因素主要有激素濃度、瓊脂用量、溫度、離子水平、光照時(shí)間、通風(fēng)條件等。 玻璃化的原因 玻璃化的起因是細(xì)胞生長過程中的環(huán)境變化。 5)培養(yǎng)時(shí)間過長 褐變的預(yù)防 1) 選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w 2) 對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理 3) 選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 4) 添加褐變抑制劑和吸附劑 5) 連續(xù)轉(zhuǎn)移 五、外植體的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施 玻璃化 是指組培苗出現(xiàn)葉、嫩梢呈水晶透明或半透明,植株矮小腫脹,失綠,葉片皺縮成縱向卷曲,脆弱易碎;葉表皮缺少角質(zhì)層蠟質(zhì),沒有功能性氣孔,不具有柵欄組織,僅有海綿組織;體內(nèi)含水量高,但干物質(zhì)、葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素和木質(zhì)素含量低的現(xiàn)象。 褐變的影響因素 3)外植體受傷害程度 外植體受傷害程度可影響褐變,化學(xué)消毒劑對(duì)外植體的傷害也會(huì)引起褐變。 2)外植體部位及生理狀態(tài) 外植體部位及生理狀態(tài)不同,接種后褐變的程度不同。 褐變的原因 1)植物種類及基因型 不同種植物、同種植物不同類型、不同品種在組織培養(yǎng)中褐變發(fā)生的頻率、嚴(yán)重程度都存在很大差別。 褐變包括酶促褐變和非酶促褐變,一般主要是酶促褐變引起的。在液體培養(yǎng)中,振蕩培養(yǎng)是解決通氣的良好辦法。因此,要求室內(nèi)保持70%80%的相對(duì)濕度。二是培養(yǎng)室的濕度,它的濕度變化隨季節(jié)和天氣而有很大變動(dòng)。低于15?C或高于 35?C,對(duì)生長都是不利的。培養(yǎng)室一般所用的溫度是 25?C177。 溫度 離體培養(yǎng)中對(duì)溫度的調(diào)控要比光照顯得更為突出。 普通培養(yǎng)室要求每日光照 12h16
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