【正文】 。 2. DNA復(fù)制的過程 ? 3. 原核生物與真核生物中的 DNA聚合酶有哪些種類，它們各自的功能是什么 ? 4. DNA復(fù)制時(shí)前導(dǎo)鏈與隨從鏈的合成有哪些不同 ? 5. 轉(zhuǎn)座 作用機(jī)理及遺傳學(xué)效應(yīng)？ 6. 原核生物與真核生物基因組特點(diǎn)。 ?引起生物進(jìn)化：產(chǎn)生新的操縱單元或表達(dá)單元。 ?產(chǎn)生 新 的基因 。 圖 23 4 3 T n 的兩條鏈先后被切割，然后轉(zhuǎn)座子與切開 的靶位點(diǎn)連接。 ?不形成共合體 。 復(fù)制性轉(zhuǎn)座子 非復(fù)制型轉(zhuǎn)座 ?斷裂和重接反應(yīng)使靶重構(gòu) 。 Mu 轉(zhuǎn)座產(chǎn)生交換結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)通過復(fù)制產(chǎn)生共合體， 共合體中的轉(zhuǎn)座子之間發(fā)生交換產(chǎn)生 2 個(gè)重組子。轉(zhuǎn)座酶和解離酶起作用 ? 非復(fù)制性轉(zhuǎn)座：原轉(zhuǎn)座子作為一個(gè)可移動(dòng)的實(shí)體直接被移位。 (三） 轉(zhuǎn)座 作用機(jī)理 ? 受體分子有 3－ 12bp的能被復(fù)制的靶序列 DNA，轉(zhuǎn)座子插入其中。 ? 供體中無轉(zhuǎn)座子 。 非復(fù)制型轉(zhuǎn)座 ? 一個(gè)位點(diǎn)移到另一位點(diǎn) 。 ? 兩種酶：轉(zhuǎn)座酶和解離酶 。 ? 首先 轉(zhuǎn)座酶 交錯(cuò)切開宿主靶位點(diǎn) ， 然后 IS插入 ， 與宿主的單鏈末端相連接 ， 余下的缺口由 DNA聚合酶和連接酶 加以填補(bǔ) ， 最終插入的 IS兩端形成了 DR或靶重復(fù) 。 靶位點(diǎn)直接重復(fù)序列的形成 2 復(fù)合轉(zhuǎn)座子 （ posite transposon） ?復(fù)合轉(zhuǎn)座子是由 兩端的組件由 IS元件 組成，中間夾著一個(gè)或多個(gè) 結(jié)構(gòu)基因 如某些抗藥性基因和其它基因組成。 Barbara McClintock (19021992) Nobel Prize for Physiology or Medicine 1983 (二 )轉(zhuǎn)座子的分類 1 轉(zhuǎn)座因子的類型 插入序列 (Insertion sequence， IS) ? 最簡單的轉(zhuǎn)座子稱為插入序列 。 轉(zhuǎn)座子可以在不同復(fù)制子之間轉(zhuǎn)移，以非正常重組方式從一個(gè)位點(diǎn)插入到另外一個(gè)位點(diǎn)，對新位點(diǎn)基因的結(jié)構(gòu)與表達(dá)產(chǎn)生多種 遺傳效應(yīng) 。 DNA連接酶連接 利用 DNA聚合酶 I切除損傷部位，補(bǔ)上核苷酸 核苷酸切除修復(fù) 1） 通過特異的核酸內(nèi)切酶識(shí)別損傷部位 2） 由酶的復(fù)合物在損傷的兩邊切除幾個(gè)核苷酸 3） DNA 聚合酶以母鏈為模板復(fù)制合成新子鏈 4） DNA連接酶將切口補(bǔ)平 識(shí)別損傷部位 損傷的兩邊切除幾個(gè)核苷酸 DNA 聚合酶以母鏈為模板復(fù)制合成新子鏈 DNA連接酶將切口補(bǔ)平 4 、 DNA的直接修復(fù) 在 DNA光解酶 的作用下將環(huán)丁烷胸腺嘧啶二體和 64光化物還原成為單體 甲基轉(zhuǎn)移酶 使 O6甲基鳥嘌呤脫甲基生成鳥嘌呤，防止GT配對 五、 DNA的轉(zhuǎn)座 （一）基本概念： DNA的轉(zhuǎn)座：由可移位因子介導(dǎo)的遺傳物質(zhì)重排現(xiàn)象。 五、 DNA的修復(fù) DNA修復(fù)系統(tǒng) 功能 錯(cuò)配修復(fù) 恢復(fù)錯(cuò)配 堿基切除修復(fù) 切除突變的堿基 核甘酸切除修復(fù) 修復(fù)被破壞的 DNA DNA直接修復(fù) 修復(fù)嘧啶二體或甲基化 DNA 錯(cuò)配修復(fù) ● Dam甲基化酶使母鏈位于 5?GATC序列中腺甘酸甲基化 ● 甲基化 緊隨在 DNA復(fù)制之后進(jìn)行 ● 根據(jù)復(fù)制叉上 DNA甲基化程度，切除尚未甲基化的子鏈上的錯(cuò)配堿基 根據(jù)母鏈甲基化原則找出錯(cuò)配堿基的示意圖 發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配堿基 在水解 ATP的作用下，MutS， MutL與堿基錯(cuò)配點(diǎn)的 DNA雙鏈結(jié)合 MutSMutL在 DNA雙鏈上移動(dòng)，發(fā)現(xiàn)甲基化 DNA后由 MutH切開非甲基化的子鏈 甲基化指導(dǎo)的錯(cuò)配修復(fù)示意圖 錯(cuò)配堿基位于切口 3’下游端 ， 錯(cuò)配堿基位于切口 5’上游端， 堿基切除修復(fù) 一些堿基在自發(fā)或悠變下會(huì)發(fā)生脫酰胺，然后改變配對性質(zhì)，造成氨基轉(zhuǎn)換突變 ? 腺嘌呤變?yōu)榇吸S嘌呤與胞嘧啶配對 ? 鳥嘌呤變?yōu)辄S嘌呤與胞嘧啶配對 ? 胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏づc腺嘌呤配對 胞嘧啶去氨基生成尿嘧啶 如果復(fù)制發(fā)生就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)突變 .糖甘水解酶識(shí)別改變了的堿基，把堿基從 Nβ 糖苷鍵處切下來，在 DNA鏈上形成去嘌呤或去嘧啶位點(diǎn)，統(tǒng)稱為 AP位點(diǎn)。 ? 此外，真核生物復(fù)制起始還包括轉(zhuǎn)錄活化、復(fù)制起始復(fù)合物的合成和引物合成等階段。 ? ③ 復(fù)制子水平調(diào)控 ，決定復(fù)制的起始與否。促細(xì)胞分裂劑、致癌劑、外科切除等都可誘發(fā)細(xì)胞由 G1期進(jìn)入 S期。 真核細(xì)胞中 DNA復(fù)制有 3個(gè)水平的調(diào)控 ? ① 細(xì)胞生活周期水平調(diào)控 ，也稱為限制點(diǎn)調(diào)控，即決定細(xì)胞停留在 G1期還是進(jìn)入 S期。 G1是復(fù)制預(yù)備期， S為復(fù)制期， G2為有絲分裂 準(zhǔn)備期， M為有絲分裂期。 ? 另一個(gè)負(fù)調(diào)控因子 Rop蛋白能提高 RNA1與引物前體的相互作用，從而加強(qiáng)了 RNA1的負(fù)調(diào)控作用。 ? RNA1不僅控制質(zhì)粒的拷貝數(shù)而且決定了質(zhì)粒的不相容性。 ? 質(zhì)粒 DNA編碼兩個(gè)負(fù)調(diào)控因子 Rop蛋白和反義 RNA（ RNA1）它們控制了起始 DNA復(fù)制所必需的引物合成。 四、 DNA的復(fù)制調(diào)控 (自學(xué) ) DNA的復(fù)制調(diào)控 ? 染色體的復(fù)制與細(xì)胞分裂同步但不直接偶聯(lián) ? 復(fù)制子由 復(fù)制起始物位點(diǎn) 和 復(fù)制起點(diǎn) 組成：復(fù)制起始物位點(diǎn)編碼復(fù)制調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，復(fù)制起點(diǎn)與調(diào)節(jié)蛋白作用啟動(dòng)復(fù)制 ? 基因編碼的調(diào)節(jié)蛋白 通過與復(fù)制復(fù)合物的相互作用確定復(fù)制起始頻率和復(fù)制方式 。真核生物快速生長時(shí)，往往采用更多的復(fù)制起點(diǎn)。 2）不需 RNA引物，在正鏈 3?－ OH上延伸 3）只有一個(gè)復(fù)制叉 。前導(dǎo)鏈 DNA開始復(fù)制前，復(fù)制原點(diǎn)的核酸序列被轉(zhuǎn)錄生成短RNA鏈，作為起始 DNA復(fù)制的引物。 雙鏈環(huán)狀、 θ 型復(fù)制、雙向等速 DNA雙鏈的復(fù)制 (1)θ 型 大腸桿菌基因組的復(fù)制原點(diǎn)位于天冬酰胺合酶和ATP合酶操縱子之間，全長 245bp，稱為 OriC。 切除 RNA引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰的 DNA片段（復(fù)制終止） 在 DNA聚合酶 Ⅰ 催化下切除 RNA引物；留下的空隙由 DNA聚合酶 Ⅰ 催化合成一段 DNA填補(bǔ)上；在DNA連接酶 作用下，連接相鄰的 DNA鏈 （四） DNA復(fù)制方式 ? 生物體內(nèi) DNA雙鏈的復(fù)制大都是以 半保留方式 進(jìn)行的，這是 共性 ； ? 但不同生物體內(nèi) DNA分子的存在形式各不相同（有大、有小、有線性分子、有環(huán)狀分子），功能狀態(tài)也不一樣（有的保守、有的極為活躍），因而反映在復(fù)制方式上也有差