雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體(參考版)
2025-05-05 08:35本頁(yè)面
【正文】 課外學(xué)習(xí)視頻： 單克隆抗體制備 。人源性融合 親本細(xì)胞需具有較高的融合率、產(chǎn)生的雜交瘤核型穩(wěn) 定并能產(chǎn)生一定量的具有特異性的抗體等特征。但 是，人 — 鼠雜交瘤的人單克隆抗體分泌性能 很不穩(wěn) 定 ，多數(shù)情況下雜交瘤會(huì) 很快失去抗體分泌能力 。 人 — 鼠雜交瘤 ：融合方法基本與鼠 — 鼠雜交瘤相同。 通過(guò)人源化改造獲得 低免疫原性、高效性、人源性單 克隆抗體， 解決鼠雜交瘤單抗用于人體的變態(tài)反應(yīng)的 問(wèn)題。 常用 生 物反應(yīng)器培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)單抗 雜交瘤細(xì)胞 生物反應(yīng)器 培養(yǎng)液 離心除去細(xì)胞，收集上清液提取抗體。也可 用注射器抽取腹水， 可反復(fù)收集數(shù)次 。 缺點(diǎn)是 采血量有限 。 （ 1） 血清法 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雜交瘤細(xì)胞 按 1～ 3 107cells／ ml 接種于 小鼠背部皮下，每處注射 ml。 取上清以 ELISA法篩選出 針對(duì)目標(biāo)抗原的 抗體分泌性高的雜交瘤細(xì)胞 株，增殖后凍存。 A, 氨基喋呤 。 融合雜交瘤細(xì)胞 ： 具有親代雙方的遺傳性能，具有 來(lái)自于淋巴細(xì)胞內(nèi)的 HPRT與 TK ，因此 可利用培養(yǎng)基 中的嘌呤與嘧啶采用 補(bǔ)救途徑合成 DNA， 因此可在 HAT培養(yǎng)基中 存活與繁 殖 。 （ 2）融合的瘤細(xì)胞一般是 HPRT與 TK缺陷型 ， 因此 也 不能采用補(bǔ)救途徑合成 DNA。 剩余： B淋巴 細(xì)胞與瘤細(xì)胞的 雜交瘤 細(xì)胞 +未融合的瘤細(xì)胞 + 融合的瘤細(xì)胞 ，其中 后 兩種 需進(jìn)行特別的 HAT液培養(yǎng)篩 選去除。 4 融合細(xì)胞的篩選 融合的 B淋巴 細(xì)胞和瘤（雜交瘤）細(xì)胞、 融合的 B淋巴 細(xì)胞、 融合的瘤細(xì)胞、 未融合的 B淋巴 細(xì)胞、未融合的 瘤細(xì)胞以及細(xì)胞的多聚體 等 。將融合后細(xì)胞懸液加入 96孔板 ， 100μ l ／孔， 37℃ 、 5％ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 。加預(yù)熱的 不完全培養(yǎng)液，終止 PEG作用。 HAT篩選原理 DNA的合成： 正常途徑： 糖、氨基酸 —— 核苷酸 —— DNA ，可以被 氨 基蝶呤 阻斷 胸腺嘧啶核苷激酶（ TK） 補(bǔ)救途徑 ： 核苷酸前體 —— 核苷酸 —— DNA 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（
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