x射線晶體衍射測定蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)(參考版)
2025-04-29 13:10本頁面
【正文】 。 2. 了解晶體鑒定的基本要點。 03年利用北京同步輻射實驗室生物大分子晶體學(xué)線站獲得了該晶體的高分辨率衍射數(shù)據(jù) ， 最終獲得 ?；羝娼? ， 1972 五、應(yīng)用實例 LHC II（膜、疏水， ） Nature, 2022, Mar. LHCII是綠色植物中含量最豐富的主要捕光復(fù)合物 ， 這種復(fù)雜的分子體系鑲嵌在生物膜中 ， 具有很強(qiáng)的疏水性 ， 難以分離和結(jié)晶 。 豬胰島素 (蛋白質(zhì)編號 4ins)的兩條小鏈 “中國蛋白質(zhì)晶體學(xué)研究水平和世界發(fā)達(dá)國家一樣高！ 胰島素晶體最好的電子密度圖在北京，不在牛津。 衍射方向 二、 X射線晶體結(jié)構(gòu)測定基本過程 ① 蛋白質(zhì)獲取（提純） ②晶體生長并經(jīng)冷凍技術(shù)處理 ③重原子衍生物制備 ④衍射數(shù)據(jù)收集 ⑤衍生數(shù)據(jù)分析和改進(jìn) ⑥結(jié)構(gòu)模型的獲?。òㄐ拚? （ 2）晶體生長過程及影響因素 ? 晶核（盡量少） ? 微晶（可用作晶種） ? 晶體在數(shù)小時至數(shù)月后出現(xiàn) ? 2個問題： ① 是鹽晶嗎？ ② 能給出有用的衍射嗎？（多晶 /雙晶） ? 影響因素 ? 物理因素 ： 溫度、壓力、震動、溶劑清潔度、試劑純度、重力、外加物理場等 ? 生物化學(xué)因素 ： pH、離子強(qiáng)度、沉淀劑 /添加劑的類型和濃度等 ? 其他 ： 溶液過飽和度、純度等 “經(jīng)驗” “機(jī)器人” （ 2）晶體生長過程及影響因素 （ 3）結(jié)晶方法 ? 批量結(jié)晶法 batch crystallization ? 透射法 crystallization by dialysis ? 液相擴(kuò)散法 liquid diffusion ? 氣相擴(kuò)散法 vapor diffusion ? 氫氘交換質(zhì)譜技術(shù) Enhanced amidehydrogen/deuteriumexchange mass spectrometry, DXMS ? 生物玻璃 bioglass （ 4）晶體的初步鑒定 小分子晶體 蛋白質(zhì)晶體 邊界 完整，漂亮 常不完整，易出現(xiàn)多晶 硬度 偏硬，易碎成 2瓣或幾瓣 偏軟，易碎成粉 脫水 不變化 因脫水而變壞 溶解性 慢 快 偏光性 強(qiáng) 相對弱 染色性 弱 強(qiáng) 漂浮性 下沉 漂浮 （ 5）衍射數(shù)據(jù)收集 ? 晶體的處理：低溫液氮氣冷流技術(shù) ? 數(shù)據(jù)收集儀： 底片、面探測器 衍射分析儀器的發(fā)展 ? 射線種類：連續(xù)射線 特征射線 電子衍射 中子衍射 ? 探測技術(shù)：膠片 閃爍體計數(shù)器（點） （ IP） CCD
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