揚(yáng)州大學(xué)基因工程期末試題復(fù)習(xí)要點(diǎn)整理(參考版)
2025-04-27 22:25本頁面
【正文】 。對報告基因來講，還可以利用報告基因的顯色或發(fā)光特性進(jìn)行選擇與 鑒定出現(xiàn)轉(zhuǎn)基因沉默現(xiàn)象的可能原因分析。(2)基因的轉(zhuǎn)錄/表達(dá)水平的檢測與鑒定(外源基因是否表達(dá)):可用RTPCR法或者Northern Blotting。第八章 植物基因工程什么叫轉(zhuǎn)基因植物？植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術(shù)，在離體條件下對不同生物的DNA進(jìn)行加工，并按照人們的意愿和適當(dāng)?shù)妮d體重新組合，再將重組DNA轉(zhuǎn)入生物體或細(xì)胞內(nèi)，并使其在生物體內(nèi)或細(xì)胞中表達(dá)的植物。 表達(dá)載體和基因工程一般克隆載體在元件構(gòu)成上有何差別？表達(dá)載體：啟動子；終止子；核糖體結(jié)合位點(diǎn)（SD序列）；篩選標(biāo)記；復(fù)制子（質(zhì)?？截悢?shù)）；多克隆位點(diǎn)克隆載體：篩選標(biāo)記；復(fù)制子（質(zhì)?？截悢?shù)）；多克隆位點(diǎn) 根據(jù)表達(dá)蛋白用途的不同，設(shè)計選擇基因的表達(dá)策略。 表達(dá)蛋白可存在于胞內(nèi)和胞外酵母表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn)：酵母表達(dá)蛋白有時會出現(xiàn)蛋白切割問題（這個找不到，百度的）如何提高克隆基因的表達(dá)水平？1）、表達(dá)載體的優(yōu)化設(shè)計；2）、提高目標(biāo)基因mRNA和目標(biāo)基因產(chǎn)物的穩(wěn)定性；3）、密碼子偏愛性；4）、表達(dá)環(huán)境條件的優(yōu)化。 營養(yǎng)要求低，工業(yè)化生產(chǎn)成本低252。 具有強(qiáng)的受嚴(yán)格調(diào)控的AOX1啟動子252。周質(zhì)內(nèi)含有種類繁多的內(nèi)毒素。缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的修飾加工系統(tǒng)；242。大腸桿菌表達(dá)外源基因的劣勢：242。繁殖迅速、培養(yǎng)簡單、操作方便、遺傳穩(wěn)定；242。全基因組測序，共有4405個開放型閱讀框架；242。第七章 克隆基因的表達(dá)通過比較，分析大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)各有何優(yōu)缺點(diǎn)。216。216。 建立突變體基因組文庫及野生型基因組文庫.216。 農(nóng)桿菌侵染植物得到轉(zhuǎn)化苗，篩選出表現(xiàn)某種突變性狀的個體。TDNA標(biāo)簽法克隆基因的一般技術(shù)路線。利用抗此外源基因編碼產(chǎn)物（多肽或蛋白）的抗體，通過親和純化，就能從大量的噬菌體中富集、分離出含有所要的基因的融合噬菌體。不同來源的激活因子的BD區(qū)與AD區(qū)結(jié)合后則能特異地激活BD結(jié)合基因的表達(dá)。A．酵母雙雜交技術(shù)原理：大部分真核生物的位點(diǎn)特異轉(zhuǎn)錄激活因子通常具有兩個可分隔開的結(jié)構(gòu)域，一個是DNA特異結(jié)合域（DNAbinging domain,BD），一個是轉(zhuǎn)錄激活域(transcriptional activation domain,AD)。應(yīng)用：l 基因突變體的研究：如基因的表達(dá)與不表達(dá)；l 基因時空表達(dá)的研究：如根、莖、葉；l 不同處理?xiàng)l件下的基因表達(dá)差異：如施肥與不施肥、光照與不光照。原理：SSH的核心技術(shù)是抑制性PCR，它是一種將檢測子cDNA單鏈標(biāo)準(zhǔn)化步驟和消減雜交步驟結(jié)合為一體的技術(shù)。利用該技術(shù)，目前已有越來越多的差別表達(dá)基因得以分離和鑒定，在分子生物學(xué)和基因工程研究領(lǐng)域發(fā)揮了極大的作用。l 無法定量研究。缺點(diǎn)：l 假陽性條帶多，對低豐度的基因表達(dá)不容易檢測。l 各樣本mRNA的差異可同時進(jìn)行比較。優(yōu)點(diǎn)：l 簡便、靈敏、高效、省時，能快速顯示mRNA的組成。在列陣雜交的基礎(chǔ)上，還可以進(jìn)行雜交測序，從而測定每個cDNA克隆子的序列。接頭和與接頭相鄰的酶切片斷的幾個堿基序列作為引物的結(jié)合位點(diǎn)。5）擴(kuò)增限制性片段長度多樣性（AFLP）基因組DNA經(jīng)過限制性內(nèi)切酶消化后，產(chǎn)生粘性末端。3）差異顯示PCR（DD RTPCR）利用真核生物mRNA結(jié)尾處有POLY（A）結(jié)構(gòu)，在其3`端設(shè)計象5`T11GA樣引物，該引物可與mRNA總數(shù)的十二分之一結(jié)合，從而使這部分基因得到逆轉(zhuǎn)錄，同時結(jié)合5`端的隨機(jī)引物（20條10mer），可以使不同長度的基因得到擴(kuò)增。2）抑制性差減雜交（SSH）SSH的核心技術(shù)是抑制性PCR，它是一種將檢測子cDNA單鏈標(biāo)準(zhǔn)化步驟和消減雜交步驟結(jié)合為一體的技術(shù)。（3）基于外源基因產(chǎn)物檢測法如果目的基因產(chǎn)物能降解某些藥物使菌株呈現(xiàn)出抗性標(biāo)記，或者基因產(chǎn)物與某些藥物作用是顯顏色反應(yīng)，則可根據(jù)抗性或顏色直接篩選含目的基因的克隆子。從總體上看，重組體分子的選擇與鑒定方法基本上可以分為如下幾個類型： （1）基于載體遺傳標(biāo)記檢測法在構(gòu)建基因工程載體系統(tǒng)時，載體DNA分子上通常攜帶了一定的選擇性遺傳標(biāo)記基因，轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后可以使后者呈現(xiàn)出特殊的表型或遺傳學(xué)特性，據(jù)此可進(jìn)行轉(zhuǎn)化子或重組子的初步篩選。影響轉(zhuǎn)化率的主要影響因素:1）載體本身的性質(zhì)及其空間構(gòu)象：超螺旋構(gòu)象轉(zhuǎn)化率最高；2）插入片段的大?。翰迦肫卧酱?，轉(zhuǎn)化效率越低；3）受體細(xì)胞的類型及預(yù)處理；4）轉(zhuǎn)化方法：電擊法高于化學(xué)法。 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化原理，影響轉(zhuǎn)化率的因素有哪些？A、 化學(xué)法（CaCl2法)轉(zhuǎn)化原理：是Ca2 與細(xì)菌外膜磷脂在低溫下形成液晶結(jié)構(gòu)，后者經(jīng)熱脈沖發(fā)生收縮作用，使細(xì)胞膜出現(xiàn)空隙，質(zhì)粒或DNA重組分子便可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)（感受態(tài)細(xì)胞）。 載體的類型主要有哪些？在基因工程操作中如何選擇載體？基因工程中常用的載體(vector)主要包括質(zhì)粒(plasmid)、噬菌體(phage)和病毒(virus)三大類?！?定義：任何兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時存在于一個細(xì)胞中，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性。平端的連接對于離子濃度很敏感盡可能縮小連接反應(yīng)的體積建議放在四度冰箱連接兩天效率更高比14度好 基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大腸桿菌DNA聚合酶2）Klenow fragment3）T7 DNA聚合酶4）T4 DNA聚合酶5）修飾過的T7 DNA聚合酶6）逆轉(zhuǎn)錄酶7）Taq DNA聚合酶第四章 基因克隆的載體系統(tǒng) 作為基因工程載體，其應(yīng)具備哪些條件？! 具有針對受體細(xì)胞的親緣性或親和性（可轉(zhuǎn)移性）；! 具有合適的篩選標(biāo)記；! 具有較高的外源DNA的載裝能力；! 具有多克隆位點(diǎn)（MCS）；! 具有與特定受體細(xì)胞相適應(yīng)的復(fù)制位點(diǎn)或整合位點(diǎn)。這樣可避免載體自連，應(yīng)該可以大大提高平端連接的效率。（傳說中的網(wǎng)上答案）低溫下長時間的連接效率比室溫下短時間連接的好。目的或作用：增加插入片段與載體的接觸機(jī)會，減少載體自我連接的現(xiàn)象。載體DNA與外源DNA的分子摩爾比通常為1﹕3左右，甚至1﹕10 或更高。單價離子：150200mM NaCl，提高連接效果；185。3）反應(yīng)液中的成分：185。185。平端：HaeIIIAluIHinCIISmaI2）連接溫度185。 效率：粘性末端平端(100倍)；185。不同點(diǎn)：DNA聚合酶識別脫氧核糖核苷酸，在DNA復(fù)制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在轉(zhuǎn)錄中起作用。向339。不完全同裂酶：識
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