【正文】 雜交瘤細(xì)胞：免疫過的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞在聚乙二醇誘導(dǎo)下融合，然后用培養(yǎng)液將融合液緩慢稀釋，產(chǎn)生的融合細(xì)胞分泌抗體能力強(qiáng)，長期穩(wěn)定生長。植物的分化:胚胎分化和器官分化，受精卵－胚－種子－植株再分化:已脫分化的細(xì)胞和組織再次分化發(fā)育成為完整植株。植物細(xì)胞工程：以植物細(xì)胞為單位，應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，在離體條件下培養(yǎng)、繁殖和精細(xì)操作，使細(xì)胞的某些生物學(xué)特性按人們的意愿改變，從而改良品種、加速繁殖或得到有用的物質(zhì)的一門科學(xué)技術(shù)。原生質(zhì)體：指除去細(xì)胞壁的細(xì)胞或是說一個(gè)被質(zhì)膜所包圍的裸露細(xì)胞。Y愈傷組織：外植體產(chǎn)生的一團(tuán)無序生長的薄壁細(xì)胞。X形態(tài)發(fā)生：指細(xì)胞再生植株的過程或個(gè)體發(fā)育中機(jī)體及其器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的形成過程。W無性繁殖系：克隆，同一外植體獲得很多無性繁殖后代。生物技術(shù)藥物：是采用現(xiàn)代生物技術(shù)以基因工程為核心，借助某些微生物、動物或植物來生產(chǎn)醫(yī)藥品，其用途包括生物、化學(xué)和中藥三個(gè)方面。生物技術(shù)：從廣義角度來看，是人類對生物資源（包括微生物、植物、動物）的利用、改造并為人類服務(wù)的技術(shù)。它是一種非天然性抗體。S生物轉(zhuǎn)化：利用酶的作用將底物轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物。模擬酶：人造的具有酶性質(zhì)的催化劑R人鼠嵌合抗體：在基因水平上將鼠源單抗的H和L鏈可變區(qū)基因分離出來，分別與人Ig的H 和L鏈的穩(wěn)定區(qū)基因連接成人鼠嵌合抗體的H 和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)完整人鼠嵌合抗體。M免疫球蛋白：病人血清中出現(xiàn)同抗體結(jié)構(gòu)類似的球蛋白，統(tǒng)稱為免疫球蛋白免疫毒素：在導(dǎo)向藥物中，毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素酶工程：是酶學(xué)和工程學(xué)相互滲透結(jié)合發(fā)展而形成一門新的技術(shù)學(xué)科?？贵w酶：具有催化能力的抗體（免疫球蛋白）抗體的產(chǎn)生：機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被活化增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。K克隆化: 是指單個(gè)細(xì)胞通過無性繁殖而獲得細(xì)胞集團(tuán)的整個(gè)培養(yǎng)過程（單個(gè)細(xì)胞生物學(xué)特性和功能相同?；蚩寺≥d體：是一類能夠承載外源基因并將其帶入受體細(xì)胞得以穩(wěn)定維持的DNA分子。基因表達(dá)：是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過程?；?DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。G固定化酶：是指限制或固定于特定空間位置的酶，是經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑，屬于修飾酶。發(fā)酵工程又稱微生物工程：通過微生物完整的細(xì)胞自催化完成生物化學(xué)反應(yīng)過程，微生物既能正常生長又能過量積累目的產(chǎn)物，提供工業(yè)產(chǎn)品。良好的生長環(huán)境，延長對數(shù)生長期，獲得高密度菌體。：化學(xué)交聯(lián)法、生物學(xué)方法（雜種雜交瘤）、基因工程法：成批培養(yǎng)法、半連續(xù)培養(yǎng)法、連續(xù)培養(yǎng)法、固定化培養(yǎng)法：：：： 載體結(jié)合法、包埋法、交聯(lián)法、無載體法 機(jī)械、生物和化學(xué)等各種方法。：攪拌罐式生物反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器、固定床式生物反應(yīng)器；此外，袋式或膜式生物反應(yīng)器、中空纖維式生物反應(yīng)器、可同時(shí)制備巨載體和微囊等固定化培養(yǎng)的生物反應(yīng)器。，動物細(xì)胞細(xì)胞可分為_貼壁細(xì)胞_、__懸浮細(xì)胞_、兼性貼壁細(xì)胞 ；中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）屬于_兼性貼壁細(xì)胞_。：多克隆位點(diǎn)、選擇標(biāo)記 、復(fù)制起點(diǎn)和啟動子。6. 基因工程菌的培養(yǎng)方式有：補(bǔ)料分批培養(yǎng) 、連續(xù)培養(yǎng) 、透析培養(yǎng) 、固定化培養(yǎng)_。_rHUIFNαIb_ 上市；目前國際市場上銷售最好的基因工程藥物包括：_促紅細(xì)胞生成素EPO 、_粒細(xì)胞集落刺激因子_ 、_重組白細(xì)胞介素_ 、_重組人干擾素_等。2. 據(jù)統(tǒng)計(jì)，人類的遺傳病有6000多種，患者約占總?cè)丝诘?5%，近年來平均每年還要增加100多種新探明的遺傳性綜合癥；這些疾病歸根到底都跟_基因_有關(guān)，理論上都可以在基因水平上找到的預(yù)防、診斷和治療方法。經(jīng)改造的毒素基因，再與載體基因重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達(dá)，形成融合蛋白，再經(jīng)過純化就得到重組免疫毒素。特異性好、穩(wěn)定性強(qiáng)、滲透性佳、免疫源性低、可大量制備。因避免了第一代免疫毒素的非特異性，故能在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用。第一代免疫毒素是包含有A、B鏈完整毒素和抗體的交聯(lián)物，其中B鏈非特異性結(jié)合，使其僅在體外應(yīng)用。－前藥對。以人血漿白蛋白作為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的MTX量，使體外細(xì)胞毒性提高二倍。放射性核素標(biāo)記的抗體對腫瘤細(xì)胞殺傷較大。(1)人鼠嵌合抗體：將鼠MAb的可變區(qū)和人抗體的恒定區(qū)組成嵌合抗體由于這兩部分在空間結(jié)構(gòu)上相對獨(dú)立,其獨(dú)特的抗體親和力保持得很好,但因鼠單抗可變區(qū)的存在,應(yīng)用時(shí)仍有較強(qiáng)的排斥反應(yīng).(2)改形抗體:在嵌合抗體的基礎(chǔ)上進(jìn)一步將鼠MAb可變區(qū)中相對保守的FR替換成人的FR,保留與抗原結(jié)合的CDR部位(3)Fab抗體：Fab段由重鏈V區(qū)及CH1功能區(qū)與整個(gè)輕鏈以二硫鍵形式連接而成,(4)單鏈抗體：單鏈抗體是由一段彈性連接肽把抗體可變區(qū)重鏈與輕鏈相連而成,是具有親代抗體全部抗原結(jié)合特異性的最小功能結(jié)構(gòu)單位.(5)單域抗體：只含V區(qū)基因片段的小分子抗體,即只有VH或 VL一個(gè)功能結(jié)構(gòu)域,其分子量僅為整個(gè)Ig分子的1/12.(6)分子識別單位：只含有一個(gè)CDR多肽的抗體.?？上庖咴葱?。建立適于目的基因高效表達(dá)的發(fā)酵工藝,以便獲得較高產(chǎn)量的目的基因表達(dá)產(chǎn)物.。 產(chǎn)生雜合抗生素（1）生物合成途徑中某個(gè)酶基因突變（2）引入一個(gè)酶基因（3）利用底物特異性不強(qiáng)的酶催化形成新產(chǎn)物 組合生物合成:微生物次級代謝產(chǎn)物合成是多酶體系參與的，特點(diǎn)是：（1）通過多個(gè)催化功能的組合完成復(fù)雜化合物的合成（2）化合物為天然產(chǎn)物（3）適用于化學(xué)合成困難的復(fù)雜化合物②在氨基酸生產(chǎn)中的應(yīng)用 ③在維生素生產(chǎn)中的應(yīng)用? 主要機(jī)制是什么 ?答：基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性主要表現(xiàn)在重組質(zhì)粒的不穩(wěn)定性, 這種不穩(wěn)定性具有下列兩種表現(xiàn)形式: :重組 DNA 分子上某一區(qū)域發(fā)生缺失,重排,修飾,導(dǎo)致其表觀生物學(xué)功能的喪失 :整個(gè)重組 DNA 分子從受體細(xì)胞中逃逸.基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的產(chǎn)生機(jī)制： DNA ,為何將AB鏈編碼序列與b半乳糖苷酶基因融合？答：小分子蛋白在大腸桿菌中表達(dá)后不穩(wěn)定,。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，節(jié)省溶劑，操作方便缺點(diǎn)：pH變化大，周期長 ： （1）.生物反應(yīng)器的材料無毒，穩(wěn)定性好，一般用不銹鋼制成（2）.生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)：滿足傳質(zhì)、傳熱、混合的功能（3）.密封良好，避免污染（4）.自動檢測、調(diào)節(jié)控制精度高（5）.攪拌器轉(zhuǎn)速和通氣應(yīng)適當(dāng)（6）.容器內(nèi)表面光滑，無死角，利于清潔、滅菌（7）.拆裝、連接、清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒（8）.設(shè)備成本低 ①基因工程在抗生素生產(chǎn)中的應(yīng)用克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ： （1）在標(biāo)準(zhǔn)宿主系統(tǒng)中克隆檢測單基因產(chǎn)物（鳥槍法）（2）阻斷變株法（3）突變克隆法：基因重組（4）直接克隆法：克隆整套生物合成基因，如頭霉素C（5）克隆抗生素抗性基因法：抗性基因與合成基因連鎖（6）寡核苷酸探針法：（7）同源基因雜交法：結(jié)構(gòu)類似的抗生素有同源的生物合成基因。如土霉素，四環(huán)素，金霉素優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，節(jié)省溶劑，收率高缺點(diǎn)：過濾較困難 三、溶劑萃取法 ：改變pH，改變?nèi)軇?，改變?nèi)芙舛取＃?）特殊生長因子：①構(gòu)成輔酶 ②促進(jìn)生命活動。（2）氮源①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì) ②構(gòu)成產(chǎn)物。 5 .發(fā)酵培養(yǎng)基的配制（1）提供必要的營養(yǎng)成分（2）配制合適的濃度（3）主成分與其他成分的配比（4）控制合適的pH。一、培養(yǎng)基的影響及其控制二、溫度的影響及其控制三、溶氧的影響及其控制四、pH的影響及其控制①培養(yǎng)基的影響及其控制：糖類，脂肪，有機(jī)酸，碳?xì)浠衔铮ㄋ傩荚雌咸烟?；遲效碳源淀粉，乳糖）：無機(jī)氮源，有機(jī)氮源（速效氮源氨基酸，玉米漿；遲效氮源黃豆餅粉，花生餅粉、棉籽餅粉）。優(yōu)點(diǎn)：操作穩(wěn)定；利于機(jī)械、自動化；提高設(shè)備的利用率；減少滅菌次數(shù)；易于過程優(yōu)化。 二、補(bǔ)料分批發(fā)酵 ：補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。特點(diǎn)： 一次性；發(fā)酵過程中，營養(yǎng)不斷減少，微生物不斷增殖，環(huán)境非穩(wěn)態(tài)；微生物生長的四個(gè)時(shí)期明顯。 誘變包括：出發(fā)菌株的選擇→誘變劑種類和誘變劑劑量的選擇→ 合理的使用方法 篩選包括：初篩→重復(fù)篩選→突變株性能檢測→直到獲得新的優(yōu)良菌株。2作為標(biāo)記，在雜交育種作為出發(fā)菌株有利于雜交重組的分析。 ：生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)和選育（菌種）培養(yǎng)基制備（培養(yǎng)基）發(fā)酵條件的優(yōu)化與控制（攪拌通氣，溶氧，發(fā)酵過程參數(shù)控制，反應(yīng)器的設(shè)計(jì)）產(chǎn)物的分離、提取與精制等（純化）菌種→工藝→設(shè)備 一、菌種選育的物質(zhì)基礎(chǔ) ：DNA二、自然選育：自發(fā)突變（正負(fù)） 三、誘變育種 ：人工誘變 四、原生質(zhì)體融合：細(xì)胞融合，基因重組 （一）（1）微小損傷突變：堿基置換，碼組移動（2）染色體畸變：易位，逆位，缺失，重復(fù)（3）染色體組突變：數(shù)目變化（單倍體變多倍體）：物理誘變劑，化學(xué)誘變劑，生物誘變劑 （二）：耐受自身分泌的抗生素，：，而需要添加一些物質(zhì)（氨基酸、核苷酸等）才能生長的突變體。 （1）酶的固定化：載體吸附法和凝膠包埋法，提高擴(kuò)散效果，增加穩(wěn)定性，利于回收和連續(xù)化生產(chǎn)（2）酶的化學(xué)修飾和表面活性劑包埋：增加酶表面疏水性，改善脂溶性和穩(wěn)定性，提高催化效率。（2）酶選擇性：對固定的底物有些酶選擇性會因所處的溶劑不同而變化。 （1）水水溶性溶劑均相體系：乙醇、丙酮、甘油（2）水水不溶性溶劑兩相體系：三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚（3）反向膠束（油包水酶）（4）單相有機(jī)溶