【正文】 1 酶 反應(yīng)器 操作條件及應(yīng)用的注意事項 反應(yīng)器 操作條件的確 酶操作條件底物濃度 、 酶濃度 、 溫度 、 PH、 反應(yīng)液的混合與流動 . 注意事項酶 保持酶 反應(yīng)器 操作的穩(wěn)定性 保持 反應(yīng)器 中流體的 流動方式和狀態(tài) 防止酶的變性失活 防止微生物的污染 1 兩兩 相相 法法 培培 養(yǎng)養(yǎng) 系系 統(tǒng)統(tǒng) 必必 須須 滿滿 足足 如如 下下 條條 件件 ：： ①① 添添 加加 的的 固固 相相 （（ 如如 樹樹 脂脂 ）） 或或 液液 相相 對對 細(xì)細(xì) 胞胞 無無 毒毒 害害 作作 用用 ， 不不 影影 響響 細(xì)細(xì) 胞胞 生生 長長 和和 產(chǎn)產(chǎn) 物物 的的 合合 成成 ；； ②② 產(chǎn)產(chǎn) 物物 易易 被被 固固 相相 吸吸 附附 或或 被被 有有 機(jī)機(jī) 相相 溶溶 解解 ；； 12 ③③ 兩兩 相相 易易 分分 離離 ；； ④④ 如如 為為 固固 相相 ， 不不 可可 吸吸 附附 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 中中 的的 添添 加加 成成 分分 ， 如如 植植 物物 生生 長長 調(diào)調(diào) 節(jié)節(jié) 劑劑 、 有有 機(jī)機(jī) 成成 分分 等等 。 固固 相相 酶酶 還還 具具 有有 以以 下下 優(yōu)優(yōu) 點點 ：： ①① 可可 多多 次次 使使 用用 ， 而而 且且 在在 多多 數(shù)數(shù) 情情 況況 下下 ， 酶酶 的的 穩(wěn)穩(wěn) 定定 性性 提提 高高 。 1 固固 定定 化化 酶酶 及及 固固 定定 化化 酶酶 的的 特特 點點 ：： 酶酶 類類 可可 粗粗 分分 為為 天天 然然 酶酶 和和 修修 飾飾 酶酶 ， 固固 定定 化化 酶酶 屬屬 于于 修修 飾飾 酶酶 ， 修修 飾飾 酶酶 類類 還還 包包 括括 經(jīng)經(jīng) 過過 化化 學(xué)學(xué) 修修 飾飾 的的酶酶 和和 用用 分分 子子 生生 物物 學(xué)學(xué) 方方 法法 在在 分分 子子 水水 平平 上上 進(jìn)進(jìn) 行行 改改 良良 的的 酶酶 等等 。用化學(xué)方法合成目的基因不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘末端的 DNA 雙鏈片 段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進(jìn)行退火使連接成較長的 DNA 片段，再用連接酶連接成完整的基因?；パa(bǔ) DNA 插入片段小于 10 千堿基對，可選用質(zhì)粒載體，如大于 10 千堿基對則選用噬菌體作為載體。 互補(bǔ) DNA 第二條鏈的合成 先用堿解或核酸酶酶解的方法除去互補(bǔ) DNAmRNA 雜交鏈中的 mRNA 鏈，然后以互補(bǔ) DNA 第一鏈為模板合成第二鏈，并用核酸酶 S1 專一性切除單鏈 DNA。 互 補(bǔ) DNA 第一鏈的合成 mRNA 的 3’末端常含有一多聚腺苷酸序列，可用寡聚脫氧胸苷酸為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，開始互補(bǔ) DNA 的合成。從產(chǎn)生該蛋白質(zhì)的真核細(xì)胞中提取 mRNA，以其為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，反轉(zhuǎn)錄合成該蛋白質(zhì) mRNA 的互補(bǔ) DNA，再以互補(bǔ) DNA 為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶或 DNA 聚合酶作用下，最終合成編碼該蛋白質(zhì)的雙鏈 DNA 序列，該序列不含內(nèi)含子。 11 克隆真核基因常用的方法有哪幾種？ 答案要點：克隆真核基因常用的方法有 逆轉(zhuǎn)錄法 和 化學(xué)合成法 。上游階段是研究開發(fā)必不可少的基礎(chǔ)，它主要是分離目的基因，構(gòu)建工程菌，主要在實驗室完成。 基因工程藥物制造的主要程序是：目的基因的克隆；構(gòu)建 DNA 重組體；將 DNA 重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌；工程菌的發(fā) 酵；外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化；產(chǎn)品的檢驗等。 基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點是什么？ 答案要點： 大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障； 可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴(kuò)大這些 物質(zhì)的應(yīng)用范圍； 可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)； 內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造和去除；可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來源。轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物不是由營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)微 生物細(xì)胞的一系列代謝過程后產(chǎn)生的，而是利用微生物細(xì)胞的酶系對底物某一特定部位進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)形成的。 動物核酸類藥物主要種類和用途 DNA：能改善機(jī)體虛弱疲勞、與細(xì)胞毒藥物合用可提高細(xì)胞毒藥物對 癌細(xì)胞的選擇性作用，與紅霉素合用，可降低毒性、提高療效； RNA：口服可用于精神遲緩、記憶衰退、動脈硬化性癡呆、靜注用于刺激造血和促進(jìn)白細(xì)胞生成、治療慢性肝炎、肝硬化和初期癌癥；輔酶 A 用于動脈硬化、白細(xì)胞、血小板減少，肝、腎病等； ATP：用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、腦動脈和冠狀動脈硬化、急性脊髓灰質(zhì)炎、肌肉萎縮、慢性肝炎等。和學(xué)合成與酶促合成法，化學(xué)合成產(chǎn)物混旋需拆分，酶促合成效果較好。 氨基酸類藥物的分離純化方法 氨基酸的生產(chǎn)：蛋白質(zhì)水解，鹽酸水解迅速、完全，色氨酸被破壞，絲氨酸部分破壞；堿水解易產(chǎn)生消旋作用；酶水解不完全。理化性質(zhì)、檢驗方法、劑型、劑量、處方、儲存方式。生產(chǎn)過程中應(yīng)低溫、無菌。酶，很多理化因素使其失活。 2.、生物藥物在生產(chǎn)、制備中的特殊性有哪些？ （ 1）、原料中的有效物質(zhì)含量低：激素、酶在體內(nèi)含量極低。 （ 3）、毒副作用小、營養(yǎng)價值高 蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂類等生物藥物本身就直接取自體內(nèi)。 生理功能：（ 1）調(diào)節(jié)免疫功能和抗腫瘤作用 （ 2）抗感染作用 （ 3）抗凝血作用（ 4）抗輻射損傷作用 （ 5）將血脂 ，抗動脈粥樣硬化（ 6）其他作用 1.、生物藥物的藥理學(xué)特性 （ 1）、治療的針對性強(qiáng) 細(xì)胞色素 c 用于治療組織缺氧所引起的一系列疾病。 酶類藥物的基本要求是什么？（ P96） （ 1）在生理 pH 下，具有高活性和穩(wěn)定性 （ 2）對其作用的底物具有價高的親和力 （ 3）在血清中半衰期較長 （ 4）純度高 （ 5）免疫原性較低或無免疫原性 （ 6）有些酶需要輔酶或 ATP 和金屬離子 簡述糖類藥物的分類及其生理功能。 原理： 抗體是和抗原表面的抗原決定簇發(fā)生特異性反應(yīng)，如果待測抗原上的抗原決定簇與其它抗原上有相同的抗原決定簇，則會發(fā)生假陽性現(xiàn)象。 酵母等 → → 溶液 → → → RNA 溶液 → → RNA 沉淀 用于制備疫苗的毒株一般需要具備的條件是什么？（ P179） （ 1）毒種必須有特定的抗原性 （ 2）毒種應(yīng)有典型的形態(tài)和感染特定組織的特性 （ 3）毒種易培養(yǎng)繁殖 （ 4）不產(chǎn)生毒素 （ 5）穩(wěn)定，無恢復(fù)原致病力的現(xiàn)象 （ 6）未被其他病毒感染 氨基酸輸液的一般要求及組方原理是什么？（ P65） 要求：（ 1）所有氨基酸均為 L型 （ 2）必須含有 8 種必需氨基酸和兩種半必需氨基酸 （ 3）必需氨基酸和半必需氨基酸應(yīng)維 持一定比例 （ 4）有些氨基酸輸液還需要加入山梨醇、木糖醇、維生素、無機(jī)離子等 組方原理：一種優(yōu)良的氨基酸輸液注入人體后，各種氨基酸能得到最有效地利用，組成平衡，使臨床癥狀得到改善，體重增加而無代謝并發(fā)癥，血漿游離的氨基酸譜無顯著變化。 ，可以只沉積在載體表面 9 闡述青霉素的工藝流程以及其工藝控制條件。 染。 。 。 : 答： 。 動腳步罐 — 超濾膜反應(yīng)器。 。 。 。 缺點： ，而細(xì)胞多種酶的存在，會形成不需要的副產(chǎn)物。 ，可催化一系列反應(yīng)。 。 ： 優(yōu)點： 。 的能力。 ，顆粒均勻。 。 ： 答：依據(jù)： 1 酶促反應(yīng)的性質(zhì) ； 2 底物類型； 3 固定化方法。 答：酶以共價鍵結(jié)合于載體上即將酶分 子上非活性部位功能團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行共價結(jié)合的方法。 缺點：最適吸附酶量五規(guī)律可循，對不同的載體和不同酶的吸附條件不同，吸附量和酶活力不一定成平行關(guān)系，同時載體與載體之間結(jié)合力不強(qiáng)，酶易于脫落，導(dǎo)致酶活力下降并污染產(chǎn)物。 5 比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)。 3 反應(yīng)條件易于控制。兩相易分開，不吸附培養(yǎng)基 第六章 ： 答：（ 1）微生物種類多，品種齊全