膠體金免疫標(biāo)記培訓(xùn)班資料(參考版)
2025-04-05 00:13本頁(yè)面
【正文】 Hall JL ed., Electron Microscopy of Plant Cells. London: Academic Press. pp:2l925511. PuvionDutilleul F. l993. Procedures of in situ nucleic acid hybridization to detect viral DNA and RNA in cells by electron microscopy. in Morel G ed., Hybridization Techniques for Electron Microscopy. Boca Ratront: CRC Press. pp26929912. Roth J. l984. The protein Agold technique for antigen localization in tissue sections by light and electron microscopy. in Polak JM and Varndell IM ed., Immunolabelling for Electron Microscopy. Elsevier Science Publishers B. V. pp:1l312l13. Slot JW and Genze HJ. 1985. A new method of preparing gold probes for multiplelabelling cytochemistry. Eur J Cell Biol. 38:879114. Slot JW and Geuze HJ. l984. Gold markers for single and double immunolabelling of ultrathin cryosection. In Polak JM and Varndell ed., Immunolabelling for Electron Microscopy. Elsevier Science Publishers B. V. pp: l29l4215. Vandenbosch KA. l99l. Immunogold labelling. In: Hall JL ed., Electron microscopy of plant cells. London: Academic Press. pp:1812l8常見膠體金探針制備條件（10ml直徑10nm膠體金）探針蛋白來源分子量(kD)交聯(lián)pH最佳標(biāo)記pH蛋白用量(mg/ml)重懸浮液特異性標(biāo)記底物IgG哺乳動(dòng)物150160120BL1各種抗原IgG FabIgG水解45150BL各種抗原Protein A葡萄球菌42/32(reb)6060BL多種抗體(Fc片段)Protein G鏈霉菌454790BL多種抗體(Fc片段)麥胚凝集素(WGA)大麥36125BL幾丁質(zhì)伴刀豆凝集素(Con A)伴刀豆1022501mM Ca2++1mM Mn2+ in BLa甘露糖a葡萄糖幾丁質(zhì)蓖麻凝集素I(RCA I)蓖麻12060BLb半乳糖a半乳糖幾丁質(zhì)大豆凝集素(SA)大豆11065BLD氨酰化半乳糖花生凝集素(PA)花生110130BLD氨?；肴樘怯H和素(avidin)雞蛋67120BL生物素(biotin)鏈親和素(streptavidin)鏈霉菌60200BL生物素(biotin)b1,3葡聚糖酶煙草180BLb1,3葡聚糖纖維素酶綠色木霉160BL纖維素漆酶(lacasase)白色腐霉100BL (pH )多酚類化合物通用BL配方：50 mM PBS, pH ,，內(nèi)含1% BSA，% PEG20000，100 mM NaCl，1% NaN3。Protein A和Protein G可識(shí)別Fc部分。箭頭為木瓜蛋白酶與胃蛋白酶的酶切位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中有Ca2++、Mg2++時(shí)不能使用。100mM NaHCO3溶液的配制：。C 37176。C 37176。3H2O定容于1000毫升。50mM Na2B4O7C200mM Tris(ml)100mM HCl(ml) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 2545 2550 mM Tris溶液的配制：。C200mM Tris(ml)100mM HCl(ml)pH23176。HCl緩沖液（50mM）pH23176。2H2O定容于1000毫升。1M NaH2PO4溶液的配制：138克NaH2PO4NaAc3H2O定容于1000毫升。C可保存3個(gè)月；但定位時(shí)膠體金距離標(biāo)記位點(diǎn)較近，適于精細(xì)定位和多標(biāo)記。C可保存1年；但定位時(shí)膠體金距離標(biāo)記位點(diǎn)較遠(yuǎn)，不適于精細(xì)定位。一般蛋白標(biāo)記采用10 nm。細(xì)胞壁組分采用1520 nm膠體金。細(xì)胞結(jié)構(gòu)組分，如纖維素、b1,3葡聚糖、幾丁質(zhì)、多酚化合物等，可選擇spurr。外泌蛋白可選擇spurr。膠體金標(biāo)記技術(shù)路線的選擇1．包埋劑根據(jù)抗原或標(biāo)記底物性質(zhì)決定包埋劑種類。(2) 該方法允許多探針直接混合一步法同時(shí)標(biāo)記多種病毒。注意：(1) 如果使用間接標(biāo)記方法，不能采用或只能采用高度稀釋的抗體吸附病毒。步驟如下：(1) 鎳網(wǎng)切片向下在dd H2O上漂浮2 min；(2) 在封閉液1上漂浮30 min；(3) 用膠體金探針1標(biāo)記30 min；(4) dd H2O上漂洗除去未標(biāo)記的膠體金探針，共漂洗2次，每次510 min；(5) 在封閉液2上漂浮30 min；(6) 用膠體金探針2標(biāo)記30 min；(7) dd H2O上漂洗除去未標(biāo)記的膠體金探針，共漂洗3次，每次510 min；晾干；(8) 常規(guī)染色，觀察。單混合時(shí)大顆粒膠體金的量要適當(dāng)增加。8．利用膠體金間接標(biāo)記法進(jìn)行雙標(biāo)記的基本程序(1) 鎳網(wǎng)切片向下在dd H2O上漂浮2 min；(2) 在封閉液(BL)上漂浮30 min；(3) 把一抗A用BL稀釋100500倍，將鎳網(wǎng)切片向下漂浮3060 min；(4) dd H2O漂洗兩次各5 min，除去多余一抗A；(5) 在封閉液(BL)上漂浮30 min；(6) 用小顆粒膠體金探針A標(biāo)記30 min；(7) dd H2O漂洗兩次各5 min，除去多余膠體金探針A；
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1