菌種的傳代與保藏ppt課件(參考版)
2025-03-25 05:51本頁面
【正文】 六、實驗常用檢定菌的購買 ? 0代凍干菌種：中國生物制品檢定所 ? 2代菌種：各省市藥品檢驗所（一般為營養(yǎng)瓊脂斜面或凍存管，保存期短，應(yīng)在購買后自行傳代并采用適宜方法保存） 。從事微生物檢查的工作人員也應(yīng)該注意個人防護(hù)，避免由操作不當(dāng)而導(dǎo)致的生物危險。 全部保存菌種應(yīng)具備清單 ， 并定期向部門負(fù)責(zé)人報告 。 注意菌種有無污染和變異 ， 如發(fā)現(xiàn)污染和變異時 ， 應(yīng)及時更換 。 ? 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間定期移種 。 因工作變動時 ， 必須做好交接工作 。用平板計數(shù)。一般于冰箱中保存可用 7天 。 ? ，先用拭鏡紙蘸取少量乙醚：酒精（ 3： 1）擦拭，再用干凈拭鏡紙擦拭。染色中應(yīng)特別注意掌握好脫色時間，不宜過長或過短，否則結(jié)果不準(zhǔn)確。 ? ，水流不宜直接沖在菌膜上。用吸水紙輕輕吸干，待標(biāo)本干燥后，用油鏡觀察。 ? ：加 95％酒精 1～ 2滴于菌膜上，輕輕晃動玻片，直到不再有紫色脫出為止，約 ，用水沖洗，傾去玻片上余水。 1min后，用水沖洗，并傾去玻片上的余水。目的使菌體粘附更牢，并使染料更容易進(jìn)入菌體。 ：最好自然干燥，必要時可將標(biāo)本面朝上，小心在酒精燈火焰高空處烘干，但勿靠近火焰外層，以免烤焦。 一般同時接種幾支管 ， 其中一支用于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養(yǎng)基中 ， 其它用做工作菌種 。 取出后放人冰箱保存 ， 一般 3個月轉(zhuǎn)種一次 。 ? 取出接種棒 ， 在火焰旁將培養(yǎng)基管管塞堵上 ， 然后將接種過細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌 。 左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼 ， 右手用無名指 、 小指及掌部夾住管塞 ， 撥開管塞 ， 將接種環(huán)伸人管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下 ， 稍冷卻再移至菌苔上 ， 刮取少量菌苔 ， 隨即取出接種棒 ， 并將菌種管口移至火焰旁 。 至冰箱取出的菌種斜面 ， 應(yīng)在室溫放置約 30分鐘 ， 待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺 。 2 菌種的傳代與保存 方法 （ 1） ： 菌斜面 菌斜面 （ 保存 ） ? 培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備 ， 如斜面已無冷凝水者 ， 不宜再使用 。 ? 取出培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面于 35～37℃ 培養(yǎng) 22～ 24h，取出后仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種 3 代即可應(yīng)用。點燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取滅菌生理鹽水，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。 1 菌種的復(fù)蘇 參考流程： ?把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺。 半固體瓊脂培養(yǎng)基 （ %） 液體石蠟保存 其他保存方法簡介 ? 干燥保藏法 ? 懸液保藏法 ? 液氮保藏法 ? 梭 氏真空干燥保藏法 ? 真空干燥保藏法 ? 冷凍干燥保藏法 標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏管 四、試驗用菌種的培養(yǎng)傳代方法 ? 程序： 凍干菌 （ 0代 ） → 營養(yǎng)肉湯復(fù)蘇 （ 1代 ） → 接種（ 斜面或肉湯 2代 ） → 菌種傳代 （ 5代 ） → 5代后銷毀 ? 檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種 ， 由中國藥品生物檢定所提供 ，為冷凍干燥菌種 。 一般以高出斜面 1 ㎝ 為宜 。 3. 將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻 ， 再燒灼滅菌 ， 以免直接在酒精燈下燒灼時 ， 液體石蠟四濺 ， 引起污染 。 （ 4） 注意事項： 1. 保藏時 ， 用新鮮培養(yǎng)物接種 ， 應(yīng)檢查純度和特征 后 ， 方可進(jìn)行保藏 。 ? 適用范圍：適用于保藏部分霉菌
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