干旱脅迫下紅麻myb轉(zhuǎn)錄因子的克隆及表達(dá)特性分析-項目立項開題報告(參考版)
2025-01-24 17:05本頁面
【正文】 ：進行R2R3MYB全長擴增與生物信息學(xué)分析。 獲得紅麻葉片轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果。研究工作總體安排及具體進度：紅麻苗種植，待長到3葉期時，取完全展開葉進行RNA提取。 王諾菡 et al., 2014)。 用ProtParam()進行氨基酸基本理化性質(zhì)分析；利用Predictprotein () 和SignalP （)分別預(yù)測跨膜區(qū)、功能位點和信號肽。 目的基因的克隆與生物信息學(xué)分析通過分析紅麻根莖葉混合樣品的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中MYB類似序列，并挑選其中的部分序列（35條）全長為材料，采用Primer 軟件設(shè)計引物。利用TIANGEN 公司RNA 提取試劑盒參照說明書提取不同組織和各發(fā)育階段紅麻葉片、莖皮、根部總RNA。 總DNA、RNA 提取純化和cDNA 的制備采用CTAB 法提取紅麻葉片的基因組DNA(徐建堂 et al., 2013。以正常供水為對照，干旱脅迫處理組則停止?jié)菜幚斫M于停水后第13d，分別取正常供水（對照）和干旱脅迫處理植株的同一部位葉片（3個重復(fù)），試驗于2014 年在福建農(nóng)林大學(xué)作物遺傳改良田間實驗室和福建農(nóng)林大學(xué)作物遺傳育種與綜合利用教育部重點實驗室進行。2 材料與方法 試驗材料以福建農(nóng)林大學(xué)作物遺傳改良實驗室篩選鑒定的耐旱紅麻品種GA42 為材料，播種于玻璃溫室大型陶瓷盆中，正常栽培管理，出苗后每盆留苗20 株，最后定苗10 株。 主要研究內(nèi)容為獲得紅麻MYB 轉(zhuǎn)錄因子基因序列信息及其在不同非生物因子脅迫下的表達(dá)情況，本研究通過對紅麻根莖葉的MYB轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析，采用RTPCR 方法從紅麻轉(zhuǎn)錄本中克隆了該基因的基因組DNA 和cDNA 全長序列，并進行生物信息學(xué)分析。 存在的問題20 世紀(jì)以來，由于生態(tài)環(huán)境的惡化，各國政府及科研機構(gòu)都十分重視生態(tài)環(huán)境的修復(fù)和植物抗逆性育種的研究，而發(fā)掘和利用植物抗逆性有利基因，培育逆境條件下能保持相對穩(wěn)定的產(chǎn)量和品質(zhì)的新品種，是抗逆性育種的重要目標(biāo)。Dai 等(2007)將水稻OsMYB3R2 基因在擬南芥(Arabidopsis thaliana)中過量表達(dá)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因擬南芥提高了對干旱、鹽、低溫和ABA 脅迫的耐受力(Dai et al., 2007)。轉(zhuǎn)錄因子作為上游的調(diào)控因子可以調(diào)控下游多個相關(guān)功能基因的表達(dá)。 Raffaele et al., 2006。 Vannini et al., 2004)，并在細(xì)胞分化、形態(tài)建成和光信號傳導(dǎo)等方面起重要的調(diào)控作用(Cominelli et al., 2008。研究表明，植物MYB 基因家族在植物生長發(fā)育的全過程中都起到重要的作用，其廣泛參與次生代謝調(diào)控、對逆境脅迫和激素的應(yīng)答(Abe et al., 2003。目前已經(jīng)從各種植物中鑒定出了豐富的MYB 轉(zhuǎn)錄因子家族基因，如擬南芥中MYB 成員約有130個，玉米中約有100 個 (Haga et al., 2007。最早克隆得到的植物MYB 轉(zhuǎn)錄因子是玉
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