細菌轉(zhuǎn)化ppt課件(參考版)
2025-01-18 07:35本頁面
【正文】 。 4. 向管中加入 1ml LB液體培養(yǎng)基 (不含抗生素 ),混勻后 37℃ 振蕩培養(yǎng) 1小時 ,使細菌恢復(fù)正常生長狀態(tài) ,并表達質(zhì)粒編碼的抗生素抗性基因(Ampr )。 2. 加入 2 μl質(zhì)粒 DNA溶液 ,輕輕搖勻 ,冰上放置 30分鐘。 實驗原理 關(guān)于 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化技術(shù) 實驗原理 關(guān)于重組 質(zhì)粒的篩選與鑒定 實驗原理 關(guān)于重組 質(zhì)粒的篩選與鑒定 半乳糖苷酶的藍白斑篩選系統(tǒng)在質(zhì)粒中含有 LacZ基因的 a肽序列 ， 當(dāng)無外源DNA片段插入時 ， 質(zhì)粒表達 a肽 ， 它與宿主菌的 Lac ZM15基因的產(chǎn)物互補 ， 產(chǎn)生有活性的 B半乳糖苷酶 ，在含有指示劑 Xgal和誘導(dǎo)劑IPTG存在的情況下 ， 菌落呈藍色 （ 質(zhì)粒自身環(huán)化 ） ；在外源基因插入后 LacZ基因的閱讀框架被破壞 ， 細菌內(nèi)無半乳糖苷酶活性存在 ， 菌落呈白色 （ 陽性克隆 ） 。 做電擊轉(zhuǎn)化時 ， 懸液中有近 70%的細胞會因電擊而死亡 ， 但是這種方法很直接 ， 轉(zhuǎn)化效率 很 高 。在被轉(zhuǎn)化的細胞中，重組子基因得到表達，在選擇性培養(yǎng)基平板上可挑選所需的轉(zhuǎn)化子。這種細胞就稱為感受態(tài)細胞，即細胞處于能攝入核算分子時的生理狀態(tài)。 經(jīng)過多年的努力，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了一種方法可以增加細胞吸收外源 DNA的效率。 外源
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