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細(xì)菌的遺傳ppt課件(參考版)

2025-05-15 05:20本頁面
  

【正文】 細(xì)菌同源重組的分子基礎(chǔ) 細(xì)菌同源重組的分子基礎(chǔ) ( 1) RecBCD識別 chi序列引發(fā)重組 Chi位點: recBCD基因編碼酶的識別位點,可以促進(jìn)附近區(qū)域重組 5′GCTGGTGG 3′ 3′CGACCACC5′ RecBCD: 提供游離的 3′端單鏈(重組條件) ① 降解 DNA,核酸酶活性 ②解旋酶活性 ③ ATP酶活性 ⑵ RecA 催化單鏈同化 RecA:DNA鏈轉(zhuǎn)移蛋白 功能: ① 促進(jìn) SOS反應(yīng)中的蛋白酶活性 ②促進(jìn) DNA的單鏈與雙鏈 DNA分子中的互補(bǔ)鏈之間 進(jìn)行 堿基配對 條件: ① ATP ② 單鏈 DNA RecA可使一條 DNA單鏈置換一條雙鏈 DNA分子中同源鏈的反應(yīng)稱為 單鏈同化 發(fā)生條件: ① 單鏈區(qū) ②游離的 3’端 ③單鏈區(qū)和游離 的 3’端必須位于 這兩個分子的互 補(bǔ)區(qū)域 兩條雙鏈 DNA分子相互重組 ⑶ Ruv系統(tǒng)解離 Holliday連接點 損傷 DNA的復(fù)制產(chǎn)生間隙 RecA鏈交換 第二條鏈交換 DNA聚合酶間隙由DNA合成來填補(bǔ) RuvA, B分支遷移 RuvC切除 Holliday連結(jié)點 。 細(xì)菌同源重組的機(jī)制 細(xì)菌同源重組的特點 (1)細(xì)菌的轉(zhuǎn)化、結(jié)合和轉(zhuǎn)導(dǎo)重組都是同源重組,依賴于大范圍的 DNA同源序列的聯(lián)會。 裂解起始: 正常環(huán)出。 ? 每個選擇的標(biāo)記基因進(jìn)行多次試驗: 實驗 選擇的標(biāo)記基因 未選擇的標(biāo)記基因頻率 1 leu+ 50%azir 2%thr+ 2 thr+ 3%leu+ 0%azir 3 leu+ thr+ 0%azir ㈡ 、位點特異性轉(zhuǎn)導(dǎo): 因為噬菌體只能在細(xì)菌染色體的特定位點上整合,當(dāng)解離時只能捕獲整合位點兩側(cè)的細(xì)菌基因,因此轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體只能是受體菌獲得特定的供體菌的基因。 以普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 P1為例,測定大腸桿菌的 leu(亮氨酸合成 )、 thr (蘇氨酸合成)、 azi(疊 氮化鈉抗性)三個基因的 順序。 ㈠ 、 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo): 同源重組 錯誤包裝 (1/1000機(jī)率 ) 轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒: 把細(xì)菌染色體片段 包裝在 噬菌體蛋白質(zhì)外殼內(nèi)而產(chǎn)生 的 假噬菌體 (不包含噬菌體的遺傳物質(zhì))。 2. 轉(zhuǎn)導(dǎo) 特點: 以噬菌體為媒介 ? 細(xì)菌的一段染色體被 錯誤地 包裝 在噬菌體的蛋白質(zhì)外殼內(nèi) ? 通過感染轉(zhuǎn)移到另一個受體細(xì)胞內(nèi)。 這種過濾性因子稱為 FA,不受 DNA酶的影響 。 ③ .是否屬于 轉(zhuǎn)化 ? 結(jié)果表現(xiàn)為不受 DNA酶的影響 ,排除了由于 DNA片斷通過濾片 經(jīng)轉(zhuǎn)化實現(xiàn)基因重組可能性。 ⑴ . 將兩個沙門氏菌的營養(yǎng)缺陷型進(jìn)行雜交: phe trp tyr met+ his+ phe+ trp+ tyr+ met his ↓混合培養(yǎng) 在基本培養(yǎng)基 發(fā)現(xiàn)原養(yǎng)型的菌落 頻率為 1/105 ⑵ . 產(chǎn)生上述結(jié)果的原因 : ① .是否屬于恢復(fù) 突變 ? 高頻率出現(xiàn)不可能是回復(fù)突變。 轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)菌遺傳物質(zhì)傳遞和交換方式之一。 2 轉(zhuǎn)化基因間重組值的計算 轉(zhuǎn)化子數(shù) (重組體數(shù) ) 親組合數(shù) +轉(zhuǎn)化子數(shù) 例 :供體 trp2+ his2+ tyr1+?trp2 his2 tyr1 重組值 = = (+ )+( +) (+ +)+(+ )+( +) 三者并發(fā)轉(zhuǎn)化的頻率高 ,故這 3個基因是連鎖的, 其中 his2和 tyr1連鎖最為緊密: trp2 his2 tyr1 34 13 40 單交換時,染色體開環(huán)易降解,故不存在單交換類型; 只有雙交換和偶數(shù)的多交換才有效。 (三)轉(zhuǎn)
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