戴安hplc基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件(參考版)
2025-01-17 17:47本頁(yè)面
【正文】 聯(lián)系方式 畢業(yè)設(shè)計(jì)時(shí)有液相相關(guān)和藥學(xué)圖像處理相關(guān)問題可聯(lián)系： 。 避免頻繁關(guān)閉檢測(cè)器（開關(guān)一次氘燈，相當(dāng)于損失 30h的壽命）。 若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。 色譜柱的保養(yǎng) 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)； 當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈； 要注意流動(dòng)相的脫氣； 避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；盡量避免用緩沖鹽特別是磷酸鹽。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和 Inject位置反復(fù)沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。 進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用。推薦采用 100ul的平頭進(jìn)樣針配合 20ul滿環(huán)進(jìn)樣。 六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。在 HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。如使用得當(dāng)?shù)脑挘ㄩy進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬次而無需維修。 理想的 HPLC用水應(yīng)為 ，并通過 濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子及空氣等。 正相色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動(dòng)相極性 低～中 中～高 組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出 高效液相色譜儀的保養(yǎng) HPLC的環(huán)境設(shè)置 HPLC的日常操作條件：溫度： 10～ 30℃ ；相對(duì)濕度 80％； 最好是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電磁干擾、高振動(dòng)設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施。 RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的 80%左右。 反相色譜法 一般用非極性固定相（如 C1 C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。 正相色譜法 采用極性固定相 (如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相 )；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑 (烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。 HPLC含量測(cè)定應(yīng)用實(shí)例 A B C A. 綠原酸對(duì)照品； B. 供試品； C. 陰性對(duì)照； 1. 綠原酸 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各 10uL，按上述色譜條件測(cè)定，記錄綠原酸的峰面積，并按外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量。 L，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見下圖。 陰性對(duì)照溶液 取按處方比例及制備工藝制得不含金銀花提取物的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。 g的溶液，即得。 L。 m）； 流動(dòng)相：甲醇 –％磷酸溶液（ 26∶ 74）； 檢測(cè)波長(zhǎng)： 326 nm； 柱溫： 30℃ ； 流速： mL實(shí)驗(yàn)采用 HPLC測(cè)定金銀花所含的主要有效成分綠原酸 。 常用于考察對(duì)照品含量是否達(dá)到 98％。除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。然后依法計(jì)算。 若供試品所含的部分雜質(zhì)未與溶劑峰完全分離，則按規(guī)定先記錄供試品溶液的色譜圖 Ⅰ ，再記錄等體積純?nèi)軇┑纳V圖 Ⅱ 。 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 當(dāng)沒有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)，也可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷?duì)照溶液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)儀器靈敏度（以噪音水平可接受為限）或進(jìn)樣量（以柱子不過載為限），使對(duì)照溶液的主成分色譜峰高約達(dá)滿量程的 10％～ 25％或其峰面積能準(zhǔn)確積分［通常含量低于 %的雜質(zhì)，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD）應(yīng)小于 10%；含量在%~2%的雜質(zhì)，峰面積的 RSD應(yīng)小于 2%］。此校正因子可直接載入各品種正文中，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測(cè)峰面積。 加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，可采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子： //SSRRACfAC?式中 : C 為 濃度 ， A為峰面積； S為內(nèi)標(biāo)物 ， R為對(duì)照品 。 內(nèi)標(biāo)法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。 外標(biāo)一點(diǎn)發(fā)為最常用的定量計(jì)算方法。操作復(fù)雜的特殊樣品要求在 90～ 110％ 。 7. 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品， 分別于制備后 0、 1 2 36h測(cè)定，峰面積RSD％不得大于 3％。 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇實(shí)例 沒食子酸紫外吸收?qǐng)D譜 檢測(cè)波長(zhǎng)通常選擇其最大吸收波長(zhǎng) 測(cè)定波長(zhǎng) 參比波長(zhǎng) 2： Off 參比波長(zhǎng) 1： 300nm 響應(yīng)值 1 響應(yīng)值 2 由于很多成分在低波長(zhǎng)均具有紫外吸收，故為避免干擾，通常不宜選低波長(zhǎng)做測(cè)定波長(zhǎng) 含量測(cè)定方法學(xué)考察 4. 線性實(shí)驗(yàn) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定線性范圍 (回收率中高濃度組不能超過這個(gè)范圍 ) 5. 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一樣品或?qū)φ掌?，連續(xù)測(cè)定五次，峰面積 RSD％不得大于 3％。 含量測(cè)定方法學(xué)考察 1. 提取純化方法考察 提取方法： 超聲、索氏、回流、滲漉、浸漬等 純化方法： 液 液萃取、固相萃取、大孔樹脂、中性氧化鋁、聚酰胺等 2. 色譜 /測(cè)定條件選擇 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇： 檢測(cè)波長(zhǎng)通常選擇其最大吸收波長(zhǎng)。 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 重復(fù)性
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