史上最強(qiáng)生物課件動物細(xì)胞工程(參考版)
2025-01-16 16:03本頁面
【正文】 實驗過程要解決的問題： 如何使機(jī)體產(chǎn)生能分泌抗體的 B淋巴細(xì)胞？ 從實驗動物的什么部位提取 B淋巴細(xì)胞？ 機(jī)體內(nèi)什么細(xì)胞能無限增殖？ 用什么方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合？ 雜交瘤細(xì)胞有幾種類型？制備單克隆抗體需要哪種類型？ 如何篩選雜交瘤細(xì)胞？ 。 第二次篩選的原理和方法： 在實際免疫過程中，由于采用連續(xù)注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機(jī)體形成相對應(yīng)的一種效應(yīng) B淋巴細(xì)胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應(yīng) B淋巴細(xì)胞的特異性是不同的，經(jīng) HAT培養(yǎng)液篩選的雜交瘤細(xì)胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細(xì)胞群中篩選出能產(chǎn)生針對某一預(yù)定抗原快定簇的特異性雜交瘤細(xì)胞。 陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。 將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。 ⑸ 如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。 B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 動物細(xì)胞融合 動物細(xì)胞培養(yǎng) 單克隆抗體的制備 單克隆抗體的應(yīng)用 （ 1）融合后的雜種細(xì)胞容易成活嗎？ （ 2）制備單克隆抗體的過程應(yīng)用了哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？ （ 3） 在整個制備的過程中要經(jīng)過幾次篩選？ 思考 ： 細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活 細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) Ⅰ .篩選得到雜交瘤細(xì)胞， Ⅱ .篩選先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有 一個雜交 瘤細(xì)胞 下培養(yǎng)篩選出特異抗體的細(xì)胞群 ⑷ 怎樣篩選出 B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞間融合所形成的能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞？ 用抗體檢測和克隆化培養(yǎng)得到能分泌所需抗體的雜種細(xì)胞 —— 專一抗體檢測 。 ◆ 利用 技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得 雜交瘤細(xì)胞。 制備單克隆抗體 常規(guī)抗體獲得的方法及其特點 單克隆抗體制備的原理 ◆ 利用 產(chǎn)生特異性抗體的功能。 培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有 S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。這種克隆技術(shù)具有多種用途，但是不能 A．有選擇地繁殖某一性別的家畜 C．用于保存物種 D ，正確的是 （ ） B DNA有 D 和 S 兩條途徑，其中 D途徑能被氨基嘌呤阻斷。 “ 多莉 ” 的培育等程序如圖所示。 ⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有 。 ⑵實施細(xì)胞工程ａ時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是 ： 。 （ 6）要獲得大量的單克隆抗體， 可對獲得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行 培養(yǎng)。 （ 5）培養(yǎng) 2周后，即測定培養(yǎng)細(xì)胞 的特征，篩選出 細(xì) 胞置于不同孔內(nèi)（如圖所示）培養(yǎng)。 圖 10 （ 1）動物細(xì)胞融合（ 2）分泌特異性抗體 、無限增殖（ 3） PEG（滅活的病毒、電刺激） （ 4）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過程，在 HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，要篩選出 細(xì)胞。 （ 2）圖 10中細(xì)胞 A體外培養(yǎng)不具有 分裂能力，但能分泌 ， 細(xì)胞 B體外培養(yǎng)能夠 。 單克隆抗體 篩選 雜交細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 體外或體內(nèi) 細(xì)胞培養(yǎng) 篩選 骨髓瘤 細(xì)胞 誘導(dǎo)細(xì)胞融合 特異性雜交瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞系 提取 經(jīng)過免疫的 B淋巴細(xì)胞 動物細(xì)胞融合技術(shù) 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 單克隆抗體的制備過程： 特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖 特點：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備 注射抗原 免疫 197
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