人類染色體疾病的診斷三(參考版)
2025-01-08 23:22本頁面
【正文】 這樣便可根據(jù)彩色的熒光條帶進(jìn)行核型分析。它為人們提供了既豐富又完善的細(xì)胞遺傳學(xué)信息，包括確定標(biāo)記染色體的來源、檢測微小的染色體易位和檢測復(fù)雜的染色體易位 。 多色熒光原位雜交（ MFISH） ? MFISH相當(dāng)于在 一次雜交中給每一條染色體都涂上了不同的顏色 , 因而很容易就可看到多條染色體間的復(fù)雜易位情況和確定標(biāo)志染 色體的來源 . ? MFISH是 1996年才建立的一種新技術(shù)。抑癌基因的失活方式有：點突變、基因缺失。利用 FISH可以檢測到病毒整合到人基因組中的情況，對深入研究病毒致癌機理，以及檢測、防治腫瘤均具有重要意義； ? ④ 基因的擴增與缺失：原癌基因的激活與抑癌基因的失活是目前腫瘤研究的熱點。 ? (2) 基因診斷 (gene diagnosis) 精確、直觀、明了 ? (3) 間期細(xì)胞遺傳學(xué)（ interphase cytogeics） ? (4) FISH在腫瘤生物學(xué)中的應(yīng)用 ? ① 腫瘤細(xì)胞遺傳學(xué)（ oncocytogeics）； ? ② 基因定位： FISH可用于分離出的癌基因與抑癌基因初步定位； ? ③ 病毒基因插入基因組部分的檢測：雖然逆轉(zhuǎn)錄病毒以激活原癌基因為主，也有像腺病毒、 HPV、 SV40等病毒以蛋白產(chǎn)物與抑癌基因蛋白產(chǎn)物相互作用而誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。 ? FISH的應(yīng)用 ? (1) 基因定位與基因制圖（ gene mapping） 原理前面已敘述。 ? FISH和細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)結(jié)合，可以同時用多種顏色反應(yīng)不同的核苷酸鏈和蛋白質(zhì)，這樣可以在單個細(xì)胞內(nèi)同時找到基因的位點。因此， FISH技術(shù)可成功的幫助細(xì)胞遺傳學(xué)家做出回顧性分析。 優(yōu)勢： ? 可快捷檢測中期、間期基因組 ? 不需預(yù)先知道 DNA發(fā)生改變的部位 ? 一次實驗即可檢出待測樣本整個基因 組拷貝數(shù)的增減 多色信號采集 ? 常規(guī)的熒光顯微鏡的熒光顯微鏡的照像， 彩色膠片不易多次曝光，限制了這種聯(lián)合標(biāo)記探針的應(yīng)用，使用 CCD照像系統(tǒng)，先分別多次攝取灰色的影像關(guān)儲存在計算機內(nèi)，而后冠以人為的顏色，運用軟件系統(tǒng)融合各次得到的影像，最終形成一個復(fù)合的多顏色的圖像。比較兩種探針?biāo)鶚?biāo)的熒光信號的強度比率來判斷腫瘤患者的 DNA是否存在缺失、增加或復(fù)制。 二 從成本上看，不需要電動顯微鏡，熒光濾鏡僅使用一顆 SKY濾鏡， SKYPaint探針做一次雜交，一次圖像擷取，讓使用人員減輕時間，精力，同時獲取穩(wěn)定結(jié)果。 一 傳統(tǒng)的技術(shù)使用顯微鏡熒光濾鏡來分辨熒光信號，缺點存在嚴(yán)重的熒光信號干擾（ crosstalk),信號重疊，信號位移等，無法有效分辨染色體，也無法準(zhǔn)確診斷染色體的細(xì)微變異，異位。 如果一條染色體的顏色不相同 , 則提示 該條染色體有重組現(xiàn)象 , 根據(jù)每條染色體各自獨有 的顏色 , 可以知道哪幾條染色體之間進(jìn)行了重組 [ MFISH 對染色體間復(fù)雜易位的分析有突出優(yōu)勢 , 但是對染色體微小易位 (1MB)的分析則受到限制 , 而對染色體內(nèi)部異常的分析則無能為力 , 這包括染色體的擴增、微小缺失和倒位 染色體光譜核型比對分析技術(shù)（ SKYspectralkaryotyping)創(chuàng)新的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常檢查工具 原理：光譜核型分析 SKY經(jīng)由 CCD相機擷取圖像，利用光譜干涉儀及傅立葉轉(zhuǎn)換技術(shù)，分辨獲得圖像每一像素點的光譜，以此標(biāo)定出不同光譜的不同顏色。 探針是經(jīng)過聚合酶鏈反應(yīng) (Degenerate oligonucleotideprimed polymerase chain reaction, DOPPCR)擴增 、 流式分選 、 并用 5 種熒光素組合熒光標(biāo)記法標(biāo)記的 同源染色體 。在不正常的細(xì)胞中， BCRABL融合基因呈現(xiàn)為紅綠兩種顏色的融合，這種融合基因常常在觀察中顯示為黃色熒光（箭頭所指）。22)(q34。22)(q34。 但需要指定基因特異性的探針 ， 失去了核型分析的宏觀性 。 白血病患者腫瘤細(xì)胞中期分裂相不易獲得 ， 而且有些重要預(yù)后意義的累及基因位點的微缺失或僅存在于間期細(xì)胞中的異常 ， 傳統(tǒng)的細(xì)胞遺
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