【正文】 s Hospital 南 通 市 第 三 人 民 醫(yī) 院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 謝 謝 。 譜 效 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 單味五味子及三七 、 柴胡 、 葉下珠陰性制劑含藥血清 中均檢測到了全方制劑含藥血清中 13個藥源性成分； 五味子陰性及單味三七 、 柴胡 、 葉下珠制劑含藥血清 均未發(fā)現(xiàn)藥源性成分 。 bP＜ , vs 2。 cP＜ , vs 3 bc ab a ac ac ac ac ab ab a Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 0. 00. 30. 60. 91. 21. 5MTT 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 ac aP＜ , vs 1。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 A：單味柴胡制劑含藥血清 B：柴胡陰性制劑含藥血清 C：全方制劑含藥血清 D：空白血清 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 四、譜效結(jié)合分析藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及結(jié)果驗證 含藥血清的譜效學(xué)研究 — 藥效物質(zhì)基礎(chǔ)分析 A：單味五味子制劑含藥血清 B：五味子陰性制劑含藥血清 C：全方制劑含藥血清 D：空白血清 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 Assaying of 4 lignans in serum containing CWC 含藥血清中木脂素類成分含量測定 a. 五味子醇甲 b. 五味子醇乙 c. 五味子甲素 d. 五味子乙素 含藥血清（ A）、對照品（ B）及空白血清（ C）色譜圖 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 皂苷類成分 e c d a b a. 三七皂苷 R1 b. 人參皂苷 Rg1 Rb1 d. 柴胡皂苷 a e. 柴胡皂苷 d 總離子流圖（ TIC） A：對照品 B：含藥血清 C：空白血清 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 戈米辛 J（ m/z:389） 五味子丙素（ m/z:385） Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 含藥血清 UPLCMS/MS檢測 b c d e a 木脂素類成分 a. 五味子醇甲 b. 五味子醇乙 c. 五味子酯甲 d. 五味子甲素 e. 五味子乙素 總離子流圖（ TIC） A：對照品 B：含藥血清 C：空白血清 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 光譜圖 A：體外制劑 B：含藥血清 C：對照品 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 樣品編號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 相關(guān) 系數(shù) 夾角 余眩 相似度計算結(jié)果 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 10批含藥血清指紋圖譜重疊圖 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。 bP＜ , cP＜ , vs model 細胞凋亡定量檢測結(jié)果 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。 177。 177。 177。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 Annexin Ⅴ FITC/PI雙染色流式細胞儀定量檢測細胞凋亡 normal model serum contain CWC 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 細胞核 DAPI染色 熒光顯微鏡觀察結(jié)果 正常組 模型組 含藥血清組 Nantong Third People39。 aP＜ , bP＜ , vs normal。 含藥血清組 177。 模型對照組 177。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 MDA含量及 SOD活性測定結(jié)果 (n=6) 組別 MDA SOD 正常對照組 177。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 方差分析結(jié)果 source SS df MS F sig. B 1 P C 1 P D 1 A C 1 B C 1 P 誤差 A+A B 2 C1 C2 B1 B2 B、 C因素交互作用分析 A1B1C1D1 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 水平 因 素 A (動物 ) B (給藥方案 ) C (取血時間 ) D (取血成分 ) 1 正常大鼠 每天間隔 8h， 分兩次，連續(xù) 3天 末次給藥后 2h 血清 2 模型大鼠 第 3天 兩次間隔 1h 末次給藥后 1h 血漿 因素水平表 含藥血清制備方法 Ⅱ: 其他因素正交試驗優(yōu)選 加權(quán)評分： MTT 35%＋ ALT 35％＋ Sch 30％ 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 分組 劑量（成人等效劑量） 制劑原形 10倍 /d 甲醇提取物 5倍 /d 10倍 /d 20倍 /d 血清供體：正常 SD大鼠 給藥方案：每天間隔 8h灌胃 2次，連續(xù) 3d 采血時間：末次給藥后 1h 二、血清藥理學(xué)研究 含藥血清制備方法 Ⅰ: 給藥形式及劑量考察 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 三七皂苷 R1 (m/z:955) glc－ － glc(2→1)xyl Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 tR/min 準(zhǔn)分子離子峰 相對分子量 化合物 1 433[M+H]+ 432 五味子醇甲 2 389[M+H]+ 388 戈米辛 J 3 417[M+H]+ 416 五味子醇乙 4 559[M+Na]+ 536 五味子酯甲 5 417[M+H]+ 416 五味子甲素 6 401[M+H]+ 400 戈米辛 N 7 401[M+H]+ 400 五味子乙素 8 385[M+H]+ 384 五味子丙素 制劑中木脂素類成分 UPLCMS/MS檢測結(jié)果 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 a c d e b a. 五味子醇甲 b. 五味子醇乙 c