[醫(yī)藥衛(wèi)生]第六章動物細胞制藥(參考版)
2025-01-07 11:57本頁面
【正文】 。 二、轉(zhuǎn)基因動物的研究 應用轉(zhuǎn)基因動物來生產(chǎn)蛋白藥物，轉(zhuǎn)基因動物存在的問題：一是轉(zhuǎn)基因方法還不十分成熟，二是基因產(chǎn)品對動物健康產(chǎn)生影響，三是產(chǎn)品對人體健康產(chǎn)生影響，主要是產(chǎn)品攜帶有害病毒影響產(chǎn)品的安全。 四、采用糖基化過程，提高產(chǎn)品質(zhì)量 決定糖鏈類型的主要因素： 合成肽鏈的不同； 細胞內(nèi)糖基化酶的不同； 細胞培養(yǎng)環(huán)境的影響。 改進生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)設備，使細胞的密度進一步提高，提高生產(chǎn)效率。 改進產(chǎn)品質(zhì)量：解決好代謝產(chǎn)物糖基化問題。 二、利用代謝工程，改進培養(yǎng)工藝，降低生產(chǎn)成本 采用代謝工程改造工程細胞 代謝工程：采用基因工程手段，使工程細胞增加或減少某種酶，以改造其代謝能力和途徑，使其降低對某種營養(yǎng)物質(zhì)的需要，減少某些代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生和危害，以及控制工程細胞的增殖速度和制造產(chǎn)品的能力。 更好地利用擴增系統(tǒng)或?qū)ふ腋弑磉_位點。 一、改進表達載體，提高表達水平和產(chǎn)量 采用雜交瘤技術，提高細胞表達量。 固定床或流化床式生物反應器 特點：結(jié)構(gòu)簡單，添裝材料是對細胞無毒、又有利于細胞貼附的材料。材料為聚砜或丙烯共聚物。具有剪切力小、混合均勻、氧和營養(yǎng)的傳遞好、利于密封等優(yōu)點。特點：能供氧、攪拌速度慢、采用無氣泡系統(tǒng)、配置有進出料系統(tǒng)。 一、理想的動物細胞反應器必須具備的要求 制造生物反應器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基、細胞直接接觸的材料必須無毒性； 生物反應器的結(jié)構(gòu)必須使之具有良好的傳熱、傳質(zhì)和混合性能； 密封性能良好，可避免一切外來微生物的污染； 對培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學參數(shù)能自動檢測和調(diào)控； 可長期連續(xù)運轉(zhuǎn)； 容器內(nèi)表面要求光滑，無死角，以減少細胞或微生物的沉積； 拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維修； 設備成本低 。它與連續(xù)式操作不同之處是取出部分條件培養(yǎng)基時，絕大部分細胞仍保留在反應器內(nèi)，而連續(xù)式培養(yǎng)則同時也取出了部分細胞。 半連續(xù)式操作 將細胞和培養(yǎng)基一起加入反應器后，在細胞增長和產(chǎn)物形成過程中，每間隔一段時間，取出部分培養(yǎng)物，然后補充同樣數(shù)量的新鮮培養(yǎng)基，或另加新鮮載體，繼續(xù)培養(yǎng)。 二、動物細胞培養(yǎng)的操作方式 分批式操作 有兩種情況： 一是將細胞和培養(yǎng)基一次性加入反應器內(nèi)進行培養(yǎng)，使細胞增殖到一定密度，產(chǎn)物達到一定量后將培養(yǎng)基和細胞一并取出。為了加速細胞結(jié)團，往往加入一些直接較小的微粒，促使細胞先附著其上，再相互附著。 （ 3）結(jié)團培養(yǎng) 利用貼壁細胞有結(jié)團的特點，用攪拌反應器和罐流培養(yǎng)的方式獲得高密度的細胞，開創(chuàng)了細胞結(jié)團培養(yǎng)的新方法。一般在 107— 108細胞 /ml； C、控制微囊膜的孔徑，可使產(chǎn)物濃縮在微囊內(nèi)，有利于下游產(chǎn)物的純化； D、可采用多種上午反應器進行大規(guī)模培養(yǎng)，如 攪拌罐式生物反應器 、 氣升式生物反應器 。 凝膠的制備常常是在形成凝膠后，再用另外一種電荷相反的材料與之作用，使載體外形成一層聚合膜，然后再使膜內(nèi)的載體液化。 這些材料是靠溫度的變化來變相的，如海藻酸鈣，在鈉鹽時是液態(tài)。 B、糖類： 纖維素、瓊脂、瓊脂糖、 K— 卡拉膠、海藻酸鈣、脫乙酰幾丁質(zhì)等。 微囊培養(yǎng)是在包埋培養(yǎng)的基礎上衍生而來的，即將包埋的顆粒經(jīng)液化處理而成為微囊。而是包裹在或包埋在凝膠載體或微囊內(nèi)。 一類不加鈦，比重較輕，可與固體微載體一樣，用于攪拌罐式生物反應器或氣升式生物反應器。制作簡便，廉價。有利于細胞均勻分布在各微載體表面； F、具有良
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