動物細胞制藥ppt課件(2)(參考版)
2025-01-08 07:16本頁面
【正文】 。 需建擋案， 進行無菌性無細胞交叉污 染的檢查。轉(zhuǎn) 化率較高，拷貝數(shù)低。 ⒉ 基因載體的導入和高效表達工程細胞株 的篩選 基因載體導動物細胞 常用方法是 ： 磷酸鈣沉淀法 電穿孔法 磷酸鈣沉淀法： 溶解的 DNA 加Na2HPO4和 CaCl2 形成磷酸鈣沉淀， DNA被包在磷酸鈣沉淀中， 形成 DNA— 磷酸鈣共沉淀物，當 和細胞表面接觸時，則通過細胞 吞噬作用而將 DNA導入。 ③ 能用以篩選出外源基因已整 合的選擇標記。都含有如下基本 成分： ①允許載體在細菌體內(nèi)擴增的質(zhì) 粒序列。 ⑥如用家蠶桿狀病毒，還可在蠶 體表達外源基因。 其作為載體的 優(yōu)點： ①雙鏈 DNA，易重組 ②插入 7～ 8kb DNA不影響正 常病毒粒子的形成。 ⒈ 真核細胞基因表達載體的構(gòu)建 使用的載體有兩類： ㈠病毒載體 牛痘病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、 桿狀病毒 ㈡質(zhì)粒載體 牛痘病毒： 用構(gòu)建多價疫苗 腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒： 用于基因治療。 該細胞株適于用于多種病毒的增殖，包括多瘤病毒、脊髓灰質(zhì)炎、 狂犬病毒等，現(xiàn)重組的多種疫苗已投放市場。 Vero：從正常成年非洲綠猴 腎臟分離的。培養(yǎng)基為 DMEM加 7%胎牛血清。 BHK21:從 5只無性別的生長 1天的地鼠幼鼠腎臟中分離的 。 培養(yǎng)的該細胞株分泌的組織型纖溶酶原激活因子（ tPA）用于治療心肌梗塞，腦栓塞、肺栓塞等血栓病。 有限壽命 42～ 46代。 三、生產(chǎn)常用動物細胞 的特性 MRC5：
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