【正文】 01020304050604 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3月份陽(yáng)性率(%)圖 1： 血清乙腦抗體在不同月份的陽(yáng)性率情況 II 。 HI + 合計(jì) 陽(yáng)性率 % LAT + 56 6 62 5 27 32 合計(jì) 61 33 94 陽(yáng)性率 % 符合率 % 乳膠凝集抗原保存期試驗(yàn) ? 0℃ 4℃ 可保存一年以上 , 室溫可保存二個(gè)月 ,表明乙腦乳膠抗原便于保存和運(yùn)輸 。 ? 重復(fù)性：批內(nèi)及批間檢測(cè)結(jié)果基本一致 。 ? ELISA與 HI、 ELISA與 LAT檢測(cè)結(jié)果 3. 結(jié)果與分析 ? 結(jié)果與分析 ? 最佳致敏濃度：抗原 1:32倍稀釋 ， 蛋白含量為 。 ? 采用 OD值之差作為病毒蛋白抗原與血清反應(yīng)產(chǎn)生的 OD值，消除對(duì)照抗原的影響。 ? 以 HI檢測(cè)為陰性的 92份血清為參考初步確定了陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) 。 ? 定性： S/P≥ 陽(yáng)性界限判為陽(yáng)性 ? 定量： S/P≥ 陽(yáng)性界限 的血清最高稀釋倍數(shù)作為效價(jià) 。 ELISA陽(yáng)性界限的確定 ? 檢測(cè) 92份 HI檢測(cè)為陰性的血清 ， 陰陽(yáng)性臨界值以 ?S/P求得 。 ? 在 490nm波長(zhǎng)下測(cè)定 OD值 。 ELISA最佳 反應(yīng)條件 的確定 ? 病毒抗原及對(duì)照抗原分別橫行稀釋包被奇數(shù)列和偶數(shù)列包被過(guò)夜 。 ? 上清用冷丙酮沉淀 ， 離心后沉淀冷凍抽干 ,加入生理鹽水溶解 ， 上清作為病毒抗原 。 ? 本病主導(dǎo)性防制措施是滅蚊和免疫接種 ? 人用乙腦疫苗 :鼠腦滅活疫苗，原代地鼠腎滅活疫苗和原代地鼠腎減毒活疫苗 ? 獸用疫苗主要有減毒活疫苗和鼠腦滅活疫苗 ? 新一代的乙腦疫苗：亞單位疫苗，重組活疫苗和核酸疫苗 乙腦酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 乙腦 ELISA抗原的制備 ? 將病毒分別接種于 9日齡雞胚的尿囊腔中 ，37℃ 進(jìn)行培養(yǎng) 48小時(shí)后收集尿囊液 。 ? 牛、羊及家禽多為隱性感染，馬可發(fā)生嚴(yán)重的腦炎 ? JE的病原為乙腦病毒 (Japanese encephalitis Virus,JEV) ? JEV原屬于報(bào)膜病毒科 (Tongaviridae)乙組蟲(chóng)媒病毒的黃病毒屬 (Flavivrius) ? 1984年另立為黃病毒科 (Flaviridae) ? JEV分三個(gè)清型： JaGAr,Nakayama和Mie(intremediate type) ? JEV粒子呈球形，呈 20而體對(duì)稱，有囊膜，毒粒直徑為 45nm50nm(核心 30nm)，是黃病毒科最小的病毒之一 ? JEV在環(huán)境中不穩(wěn)定 ? 10%滅活兔血清和 %乳白蛋白水解物等對(duì)病毒有較好的保護(hù)作用 ? JEV大多數(shù)毒株能凝集鵝、鴿及初生雛雞的紅細(xì)胞， pH以 ? 乙腦病毒可在 79日齡的雞胚和多種組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)增殖 ? 通常只在倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、豬腎和羊胎腎細(xì)胞上恒定地引起細(xì)胞病變 (CPE) 乙腦病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展 ? JEV為單股正鏈 RNA病毒，基因組長(zhǎng) 11Kb，沉降系數(shù)為 42S，具有感染性 ? 整個(gè)基因組由 5’端非編碼區(qū) (5’noncoding region,5’NCR)，一個(gè)幾乎跨越整個(gè)基因組的單一開(kāi)放閱讀框 (ORF)和 3’端非偏碼區(qū) (3’NCR)構(gòu)成，無(wú)亞基因組結(jié)構(gòu) ? ORF大小為 ，共編碼約 3430個(gè)氨基酸基 ? ORF編碼 1個(gè)多聚蛋白前體 ? C蛋白起調(diào)節(jié)蛋白和保護(hù)基因組免受核酸酶破壞的作用，與病毒的復(fù)制和生物合成密切相關(guān) ? M蛋白參與病毒的感染過(guò)程，它能誘生具有輕度中和作用的抗體 ? E蛋白為主要結(jié)構(gòu)蛋白，該蛋白在大多數(shù)黃病毒中是保守的，它是毒粒表面的重要成份，由它形成的表面抗原決定簇具有血凝活性和中活作用，能刺激機(jī)體產(chǎn)生血凝抑制抗體和中和抗體，可保護(hù)機(jī)體免受病毒的攻擊，與病毒的吸附，侵入，致病和誘導(dǎo)縮主的免疫應(yīng)答等作用密切相關(guān) ? NS1為分泌型糖蛋白，其具體功能不清，但認(rèn)為其參與病毒復(fù)制的早期階段 ,NS1還可能參與病毒的組裝和釋放，是主要的抗原成份之一。 ? 乙腦對(duì)人類的危害 ：死亡、殘疾 ? 患者癥狀：高熱、狂暴或沉郁等神經(jīng)癥狀為主要特征 ? 其臨床表現(xiàn) ：潛伏期 5d15d，病程可分為 3個(gè)階段：初期、急性腦炎期、恢復(fù)期 。 該病是我國(guó)及亞州地區(qū)的一種嚴(yán)重傳染病 ， 我國(guó)除少數(shù)省 ， 自治區(qū)外 ， 大部分地區(qū)都有 JE流行 。 小鼠腦內(nèi) 致病力試驗(yàn) 毒性試驗(yàn) 懷孕母豬 安全試驗(yàn) 動(dòng)物數(shù) 接種途徑 劑量 (mL) 結(jié)果 10只 4只 3頭 腦內(nèi) 腹腔 耳靜脈 3 14d無(wú)死亡 30min內(nèi)無(wú)異常 反應(yīng)， 3d內(nèi)健存 II 采 血 時(shí) 間（周） 0 1 2 4 6 8 I — — 1:2(1) 1:8(2) 1:8(3) 1:8(3) 1:1(3) 1:4(1) 1:4(1) 1:4(1) 1:2(1) II — — 1:4(1) 1:8(2) 1:8(2) 1:8(2) 1:2(1) 1:2(2) 1:2(2) 1:4(1) 1:1(1) 1:2(1) III — — 1:1(4) 1:4(1) 1:4(3) 1:4(4) 1:2(2) 1:2(1) 1:1(1) 疫苗免疫鼠抗體水平檢測(cè) ( LAT ) 批 次 II 減毒活疫苗免疫鼠細(xì)胞免疫水平檢測(cè) 012JEV ConAControlTestS I II 劑量 豬號(hào) 免前