葡聚糖凝膠測(cè)蛋白質(zhì)分子量-wenkub.com
2024-10-31 05:37 本頁(yè)面
【正文】 未知分子量的蛋白質(zhì)在相同條件下層析，根據(jù)其洗脫(xǐ tuō)體積即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上求得分子量。ir243。該方法是把樣品加到充滿(mǎn)著凝膠顆粒的層析柱中，然后用緩沖液洗脫。,四 洗脫和收集 用0.1mol 柱裝得是否均勻，可用藍(lán)色葡聚糖上柱檢驗(yàn)；如果色帶均勻下移，說(shuō)明柱子已裝好，可以使用。將凝膠上面過(guò)多的溶液傾出。,裝柱時(shí)，將柱垂直至于鐵架上。溶脹平衡和漂洗凈的凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準(zhǔn)備裝柱。,試劑和材料 洗脫液：0.05M TrisHCl緩沖液〔pH7.5〕，0.1M KCl溶液：稱(chēng)取12.12g Tris，15g KCl，先用少量去離子水溶解，再參加6.67mL濃HCl，用去離子水定容至2L。 不同大小分子量的蛋白質(zhì)，進(jìn)入凝膠篩孔的程度不同，其洗脫體積決定于分子大小，蛋白質(zhì)在葡聚糖凝膠柱上層析的洗脫體積和分子量的對(duì)數(shù)呈直線(xiàn)關(guān)系。i chū)，即Kd都等于零，雖然分子大小有差異，但沒(méi)有別離效果。 當(dāng)樣品流經(jīng)凝膠柱時(shí)，大于孔隙的大分子完全不滲入到凝膠內(nèi)部，只需V0體積的洗脫液便可將其由一端洗脫到另一端；相反，如果樣品體積小于孔隙，那么需要V0＋Vi體積的洗脫液，才能將它們由一端洗脫到另一端。外水體積V0指凝膠顆粒間的自由空間所占的體積，即存在于柱床內(nèi)凝膠顆粒外
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1