特殊生物顯微鏡的原理與使用-wenkub.com
2025-03-02 11:51 本頁面
【正文】 利用聚焦的激光束在樣品表面掃描 ， 同時利用光電檢測器件接收樣品反射光 （ 或透射光 ） ，樣品結(jié)構(gòu)的變化使反射光 （ 或透射光 ）強度改變 ， 因而使光電檢測器的輸出電流改變 ， 經(jīng)信號處理 ， 同步顯示在計算機屏幕上 。組織中的自發(fā)性熒光物質(zhì)如神經(jīng)細(xì)胞和心肌細(xì)胞等內(nèi)的脂褐素呈棕黃色熒光，肝貯脂細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞內(nèi)的維生素 A呈綠色熒光，某些神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)纖維內(nèi)的單胺類物質(zhì)（兒茶酚胺、 5－羥色胺、組胺等）在甲醛作用下呈不同顏色的熒光，組織內(nèi)含有的奎寧、四環(huán)素等藥物也呈現(xiàn)一定的熒光。 落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的插塊。二是選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。 ? 顯微鏡熒光利用光源激發(fā) ——光化熒光 ? 熒光的種類： 自發(fā)熒光（固有熒光） 二次熒光 ? 熒光的性質(zhì)： 吸收光，必需有激發(fā)光源 熒光波長＞激發(fā)波長（損失熱能） 熒光強度極小于激發(fā)光的強度 有不同程度的衰減 熒光強度取決于激發(fā)光強度、被檢物濃度、熒光效率 二、熒光顯微鏡的種類： 透射式 落射式 三、熒光顯微鏡主要部件 透射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 吸收濾色鏡 ? 暗場聚光鏡 落射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 分色鏡 ? 吸收濾色鏡 熒光顯微鏡內(nèi)部構(gòu)造 落射熒光顯微鏡光路圖 透射熒光顯微鏡光路圖 WU WIB DUAL BAND WIBA WIG WIB DAPI+FITC FITC+PI 雙重染色標(biāo)本的單色和雙色觀察 ? 熒光光源 一般采用超高壓汞燈 (50一 200W)， 它可發(fā)出各種波長的光，但每種熒光物質(zhì)都有一個產(chǎn)生最強熒光的激發(fā)光波長，所以需加用激發(fā)濾片（一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片），僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標(biāo)本上，而將其他光都吸收掉。這樣在強烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認(rèn)，敏感性高，主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。如石英、糖、酒石酸鉀鈉等。 o光和 e光都是線偏振光 ,且振動方向相互垂直 二向色性：某些晶體（電氣石、硫酸金雞鈉堿晶體等）對光振動有強烈的選擇性吸收能力，這種性質(zhì)稱為二向色性。 尋常光線 (o光 ):遵守折射定律。 檢偏：檢查入射光的偏振性的過程。 偏光顯微鏡 ? 依據(jù)波動光學(xué)原理觀察和精密測定標(biāo)本細(xì)節(jié) ,或透明物體改變光束的物理參數(shù) ,以此判別物質(zhì)結(jié)構(gòu)的一種顯微鏡 ? 分辨率可達(dá) ? 將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)
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