【正文】 5．熒光抗體技術(shù)的原理及常用熒光素。 用弱毒疫苗緊急接種治療病毒病 原則：早期、大量、重復(fù)應(yīng)用和防止過敏反應(yīng) 第六節(jié)復(fù)習(xí)思考題 1．診斷試劑的種類與應(yīng)用 。 此種疫苗安全性好 ， 不易返祖；其免疫接種與強毒感染相似 ， 機體可對病毒的多種抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答；免疫力堅實 ， 免疫期長 ， 尤其是適于局部接種 ， 誘導(dǎo)產(chǎn)生黏膜免疫力 ，因而是較理想的疫苗 。 基因工程乙肝疫苗 b. 基因工程活載體苗 是用基因工程技術(shù)將保護性抗原基因 （ 目的基因 ） 轉(zhuǎn)移到載體中 ， 使之表達(dá) 。 E. 多聯(lián)苗 不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗。 特點： （ 1）研制時間較短，安全，可常溫保存； （ 2）只產(chǎn)生體液免疫，免疫效果比弱毒疫苗差； （ 3）用量較大，須加入適當(dāng)?shù)淖魟? 包括： 疫苗、診斷試劑 和 免疫血清 。 亦可用已知診斷血清或標(biāo)記抗體 ， 檢查動物體內(nèi)及排泄物中是否存在特異性抗原 ， 用以檢查病原體的存在 。 原理 : 熒光素在超低濃度時可被短波光源激發(fā)，在熒光顯微鏡下可觀察到熒光。 B. 沉淀試驗 C. 酶標(biāo)抗體技術(shù) (Enzymelabelled antibody technique) 是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化反應(yīng)的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術(shù)。 由于沉淀反應(yīng)抗原多系膠體溶液。 (二 )常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù) 常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù)的類型 （ 1） 凝聚性反應(yīng) ：凝集試驗和沉淀試驗 （ 2） 標(biāo)記抗體技術(shù) ：熒光抗體技術(shù)、酶標(biāo)抗體技術(shù)等 （ 3） 有補體參與的反應(yīng) ：如補體結(jié)合反應(yīng) （ 4） 中和反應(yīng) ：如病毒中和試驗、毒素中和試驗 凝集試驗 酶標(biāo)抗體技術(shù) A. 凝集反應(yīng) 當(dāng)顆粒性抗原與其相應(yīng)抗血清混合時 ， 在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中 ， 抗原凝集成大小不等的凝集塊 ， 叫 凝集反應(yīng) 。 第五節(jié)復(fù)習(xí)思考題 一 、 免疫學(xué)診斷 二 、 免疫預(yù)防 三 、 免疫治療 第六節(jié) 免疫學(xué)應(yīng)用 一 、 免疫學(xué)診斷 (一 )免疫診斷試劑 免疫學(xué)診斷是應(yīng)用已知診斷試劑 (抗體或抗原 )，對患病動物進(jìn)行抗原或抗體的測定，從而診斷疾病。 1．免疫應(yīng)答的概念、特點與類型。 3. 免疫耐受產(chǎn)生的條件 (1) 抗原方面 A. 抗原理化性狀： 一般而言，小分子、可溶性的非聚合單體物質(zhì)常為耐受原； B. 抗原劑量： 一般抗原量越大或動物年齡越小，越容易誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫耐受； C. 抗原注射途徑 ：靜脈注射易誘導(dǎo)免疫耐受，皮下和肌肉注射最難產(chǎn)生耐受性； D. 有無免疫佐劑： 不加免疫佐劑的抗原較易誘生免疫耐受 (2) 機體方面 A. 機體發(fā)育程度或年齡： 胚胎期最易誘導(dǎo)耐受性 B. 動物品種或品系： 一般 在胚胎期易誘導(dǎo)耐受性。 D. 在同一個體可能同時存在兩種或兩種以上的變態(tài)反應(yīng) 。 完全變應(yīng)原 ： 如異種血清、蛋白質(zhì)、花粉、微生物、寄生蟲等 不完全變應(yīng)原 ： 如藥物、青霉素等 2. 變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生過程 (1)致敏階段 ：變應(yīng)原初次進(jìn)入機體 初次免疫應(yīng)答 ， 產(chǎn)生免疫物質(zhì) (Ab或 TDTH) 機體致敏狀態(tài) (2)發(fā)敏階段 ：變應(yīng)原再次進(jìn)入機體 作用到 Ab或 TDTH 發(fā)生癥狀 根據(jù)變態(tài)反應(yīng)發(fā)生的機理和臨床特點，可分為 4個類型： Ⅰ 型變態(tài)反應(yīng) (過敏反應(yīng) ) Ⅱ 型變態(tài)反應(yīng) (細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型 ) Ⅲ 型變態(tài)反應(yīng) (免疫復(fù)合物型或血管炎型 ) Ⅳ 型變態(tài)反應(yīng) (遲發(fā)型超敏反應(yīng) ) 4. 變態(tài)反應(yīng)的特點： A. 四型變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生比較快，可由抗體介導(dǎo)，并通過血清中的抗體被動轉(zhuǎn)移給正常動物。這個階段有多種細(xì)胞間的協(xié)作和多種細(xì)胞因子的參加。 (1) 致敏階段 又稱 感應(yīng)階段 ，是 抗原物質(zhì) 進(jìn)入體內(nèi)， 抗原遞呈細(xì)胞 對其識別、捕獲、加工處理和提呈，以及 抗原特異性淋巴細(xì)胞 (T、 B淋巴細(xì)胞 )對抗原的識別階段。 生理性應(yīng)答 (免疫保護 ) 免疫 應(yīng)答 類型 對非己抗原正應(yīng)答 ， 免受外源抗原侵害 (免疫保護 ) 病理性應(yīng)答 (免疫損傷 ) 對自身抗原負(fù)應(yīng)答 ， 保護自身組織不損傷 (免疫耐受 ) 對非己抗原過高應(yīng)答 ， 引起變態(tài)反應(yīng) 對非己抗原低應(yīng)答或負(fù)應(yīng)答 ， 導(dǎo)致感染擴散或腫瘤發(fā)生 對自身抗原過應(yīng)答 ， 引起自身免疫性疾病 (二 )免疫應(yīng)答的一般規(guī)律 免疫應(yīng)答的場所 抗原遞呈細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的協(xié)作 ， 是特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)基礎(chǔ) 。 2．圖解 Ig單體的分子結(jié)構(gòu)。 影響魚類抗體產(chǎn)生的因素 A、魚種 B、抗原物質(zhì) C、溫度： Cushing于加利福尼亞工藝研究所工作期間，曾用干的海膽精液接種養(yǎng)在不同溫度下的鯉魚和鯽魚，隨后在血清中相繼產(chǎn)生凝集抗體。 Ig水解片段 木瓜水解酶可將 Ig水解成 2個 Fab段和 1個 Fc段 胃蛋白酶可將 Ig水解成一個含 雙價抗體活性 的 F(ab”)段和若干小分子多肽碎片。 在 N端，含輕鏈 1/2和重鏈1/4的區(qū)域，其氨基酸排列順序隨抗體特異性不同而有所變化，故稱為可變區(qū) (variable region, V區(qū) )；而 C端，含輕鏈 1/2和重鏈3/4的區(qū)域，其氨基酸較穩(wěn)定，稱為恒定區(qū) (constant region, C區(qū) )。而免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)和化學(xué)本質(zhì)上的概念，它們并不都具有抗體活性。 第三節(jié)復(fù)習(xí)思考題 第四節(jié) 抗體 (antibody) 一 基本概念 二 免疫球蛋白結(jié)構(gòu) 三 免疫球蛋白生物活性 四 五類免疫球蛋白特性 五 魚類免疫球蛋白特點 一、基本概念 免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig) 是指存在于人和動物血液 (血清 )、組織液及其它外分泌液中的一類具有抗體活性或與抗體具有相似結(jié)構(gòu)的球蛋白。 。而炎癥應(yīng)答則可說成是一種 警報系統(tǒng) 。這是因為哺乳動物需要堅硬的皮膚層，以防止脫水作用，而魚在水環(huán)境中，不需要這樣的保護作用。外層是由扁平的 鱗狀上皮細(xì)胞 所組成；第二層由 紡錘形細(xì)胞 組成；這兩層都散布著球形的 粘液分泌細(xì)胞 。 （ 3）真皮： 真皮位于基底膜下，是皮膚的另一保護屏障，這層的皮膚是由散布著 黑色素細(xì)胞（ melanocyte） 即黑色素細(xì)胞的纖維結(jié)締組織所組成。有些魚的鱗片穿透粘液層，而另一些魚類的鱗片，仍保持著為表皮和真皮所覆蓋。這些因子也可能存在于 魚的粘液 中。 (1) 粘液 ： 粘液 是魚最外的防御線，含有能抑制寄生物在外表區(qū)生長和寄生的 一些因子 。這些物質(zhì)可以 直接分解細(xì)菌 (如 溶菌酶、補體 )或 真菌 (如 幾丁質(zhì)酶 )，或 抑制細(xì)菌 (如 轉(zhuǎn)移因子 )或 病毒 (如 干擾素 )的復(fù)制，或作為 調(diào)理素 增加 吞噬細(xì)胞的吞噬量 (C反應(yīng)性蛋白、補休 )，乃至 中和細(xì)菌 (如 α 巨球蛋白 )。 （ 2）調(diào)節(jié)分子： ① 可溶性調(diào)節(jié)因子。在炎癥反應(yīng)中，通常表現(xiàn)為雙相反應(yīng)，即 粒細(xì)胞 先于 巨噬細(xì)胞 接近病原 。宿主產(chǎn)生的化學(xué)引誘因子包括 補體成分 和 二十碳酸 如 三烯酸 和 脂素 。在腎臟和腹腔中的這類細(xì)胞最多，血中較少。 發(fā)現(xiàn)魚類具有這 兩種淋巴細(xì)胞的功能 已有多年，但近幾年才利用抗 IgM單克隆抗體明確地證明 硬骨魚類 有獨立的淋巴細(xì)胞種群，即相對于哺乳動物的 T和 B淋巴細(xì)胞。掃描電鏡顯示腹腔巨噬細(xì)胞粘附于玻璃表面（右）。 這些分散的淋巴組織在 免疫原的攝取 方面有著重要的作用，因而在養(yǎng)殖魚類的免疫保護方面有著重要的意義，成為 研究的焦點 。 然而， 硬骨魚類 的脾臟無此分化，是 淋巴系統(tǒng)組織 發(fā)生中最后一個發(fā)生的器官 。 成魚的頭腎已失去 排泄 的功能，卻保留了 造血和內(nèi)分泌 的功能。 一 、免疫器官 二 、免疫細(xì)胞 三 、免疫分子 四 、非特異性免疫因素 一、免疫器官 中樞免疫器官 (免疫細(xì)胞產(chǎn)生 與成熟場所 ) 骨髓 (bone marrow) 胸腺 (thymus) 禽法氏囊 (bursa) 外周免疫器官 (免疫細(xì)胞分布 及應(yīng)答場所 ) 脾臟 (spleen ) 淋巴結(jié) (lymph node) 淋巴樣組織 (lymphoid tissue) 免 疫 器 官 魚類免疫器官 主要包括提供 T細(xì)胞分化環(huán)境的 胸腺 以及次級淋巴組織即 腎臟 和 脾臟 。 4． 佐劑的作用機制 ① 改變抗原物理性狀 ， 利于抗原緩慢釋放 ， 延長滯留時間； ② 利于抗原被巨噬細(xì)胞吞噬 ， 促進(jìn)抗原提呈； ③ 刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化 ， 增強和擴大免疫應(yīng)答能力 。如 A族溶血性鏈球菌與腎小球基底膜和心肌組織存在異嗜性抗原；大腸桿菌 O14型脂多糖與人結(jié)腸粘膜具有異嗜性抗原。 2． 動物免疫血清 免疫血清 ， 對本種動物具有治療疾病的作用；對另一種動物 ， 則是異