基因重組-生物合成概念-wenkub.com
2024-08-11 15:14 本頁面
【正文】 其過程和水稻葉綠體基因重組大同小異，只是除了在質(zhì)粒載體上插入抑生長(zhǎng)激素基因外，還將含有l(wèi)ac操縱子起始部分的片段（包括啟動(dòng)子、操縱區(qū)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和β－半乳糖苷酶的主要部分）插在抑生長(zhǎng)激素基因的旁邊。這樣就構(gòu)成了由EcoRI核酸限制性內(nèi)切酶切割的水稻葉綠體DNA基因組庫(kù)?！ BR322質(zhì)粒作為一種常用的基因克隆載體，在實(shí)際應(yīng)用中有著非常重要的地位，其中一個(gè)突出的例子就是應(yīng)用pBR322 作為克隆載體對(duì)水稻的葉綠體光誘導(dǎo)基因psbA 進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。此時(shí)pMB9為ampstetr表型； pMB9已經(jīng)初步具備載體的功能，為了讓它更加完善，我們要讓它具備amprtetr性能，即在pMB9上引入pSF2124的Tn3易位子，但Tn3可以來也可以走，為了留住它，我們切去了Tn3中表達(dá)轉(zhuǎn)位酶的基因，形成了pBR313質(zhì)粒。要是仍保留了原來表型的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)含有的DNA分子一定不是重組子。pBR322質(zhì)粒這種小分子量的特點(diǎn)，不僅易于自身DNA的純化，而且可容納較大的外源DNA片段；（2）具有兩種抗菌素抗性基因可供作轉(zhuǎn)化子的選擇記號(hào)，能指示載體或重組DNA分子是否進(jìn)入宿主細(xì)胞以及外源DNA分子是否插入載體分子形成了重組子。其中7種限制酶（從12：00位置按順時(shí)針方向）即EcoRV、NheI、BamHI、SphI、SalI、XmaIII和NruI的識(shí)別位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，另 外有2 種限制酶即ClaI和HindIII的識(shí)別位點(diǎn)是存在于這個(gè)基因的啟動(dòng)區(qū)內(nèi)，在這9個(gè)限制位點(diǎn)上插入外源DNA都會(huì)導(dǎo)致tetr的失活?！ ∽畛Ｓ玫馁|(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒。沒有DNA插入片段的pBR322會(huì)使宿主細(xì)菌既抗氨芐青霉素又抗四環(huán)素，而沒有pBR322質(zhì)粒的細(xì)菌將對(duì)氨芐青霉素和四環(huán)素都敏感。pBR322含有抗四環(huán)素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr)，并含有5種內(nèi)切酶的單一切點(diǎn)。質(zhì)粒的復(fù)制有時(shí)和它們的宿主細(xì)胞有關(guān)，某些質(zhì)粒在大腸桿菌內(nèi)的復(fù)制屬嚴(yán)緊型，而在變形桿菌內(nèi)則屬松弛型。這些質(zhì)粒的復(fù)制是在寄主細(xì)胞的松弛控制之下的，每個(gè)細(xì)胞中含有10200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質(zhì)的合成還會(huì)使質(zhì)?？截悢?shù)增至幾千份。細(xì)菌質(zhì)粒的相對(duì)分子質(zhì)量一般較小，%～3%。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)（補(bǔ)充：部分質(zhì)粒為RNA）。質(zhì)粒具有可自主復(fù)制、傳給子代、也可丟失及在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移等特性，與細(xì)菌的遺傳變異有關(guān)。也有利用還原型輔酶的（脂肪鏈的延長(zhǎng)）。（2）在穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，合成用于補(bǔ)充消耗掉的成分的物質(zhì)。然而在原核生物中，有時(shí)基因重組依賴于小范圍的同源序列的聯(lián)會(huì)，重組只限于該小范圍內(nèi)，只涉及特定位點(diǎn)的同源區(qū)，把這類重組稱作位點(diǎn)專一性重組(sitespecific
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