影響pcr擴(kuò)增因素的分析-wenkub.com
2025-06-26 02:18 本頁面
【正文】 PCR技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物細(xì)菌性病原檢測中的應(yīng)用. 現(xiàn)代漁業(yè)信息, 2006年7月 第2l卷 第7期 P1113[2] 張玉霞，黃鳴. 食品檢驗(yàn)中多重PCR技術(shù)的應(yīng)用. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2008年5月第18卷第5期 P958960[3]， 技術(shù)實(shí)驗(yàn)指南[M].北京：科學(xué)出版社，1998.[4]吳梅摘, N A 序列側(cè)定人發(fā)的性別. 法醫(yī)學(xué)雜志, 1 9 9 1 。本實(shí)驗(yàn)以328對5 端標(biāo)有HEX或TET或6一FAM 亞磷酸酰胺的引物及4O只cAU資源家系[6]F。HC1 pH一8．3．1mmol/LTMAC，0．1 Triton—X 100，0．01 明膠。HC1(PH8．3)和50mmol/LKC1組成[10] 。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不同循環(huán)參數(shù)、PCR緩沖液及反應(yīng)體積的對比，結(jié)果表明，循環(huán)參數(shù)中退火溫度和時間、延伸時間及PCR緩沖液的成分影響多重PCR 的擴(kuò)增效果，而反應(yīng)體積、循環(huán)次數(shù)對其擴(kuò)增效果影響較小。pH過高或過低均可引起DNA 雙鏈間氫鍵的破壞而變性,甚至也可引起鏈內(nèi)共價鍵的破壞而發(fā)生DNA降解；福爾馬林固定組織可以破壞DNA分子, 固定時間越長DNA 降解越多, 大部分DNA都降解成小片段,不適合RFLPs 分析。④PCR 反應(yīng)的緩沖液。[3]為保證反應(yīng)結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性，同時降低反應(yīng)成本， 必須系統(tǒng)地探討基因組中DNA 的PCR反應(yīng)體系中各種因素對擴(kuò)增結(jié)果的影響，對PCR 進(jìn)行優(yōu)化，以期為目地基因PCR 反應(yīng)成功提供穩(wěn)定可靠的方法。可同時檢測多種病原微生物。這個基因區(qū)段的進(jìn)化速度高于16S rDNA，因此可以發(fā)展成為細(xì)菌種甚至株的鑒定方法。細(xì)菌的16SrDNA基因核苷酸序列具有高度保守性，它的序列變化與進(jìn)化距離相適應(yīng)，被稱為一種進(jìn)化分子鐘。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍[1]。DNA合成酵素最早于1955年發(fā)現(xiàn) (DNA polymerase I), 而較具有實(shí)驗(yàn)價值及可得性的Klenow fragment of E. Coli 則是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所發(fā)現(xiàn), 但由于這個酵素是一種易被熱所破壞之酵素, 因此不符合一連串的高
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