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2025-05-02 22:48 本頁(yè)面
【正文】 第二章 種子制備 生化工藝 72 作業(yè) 。 通氣： 通氣量的多少以 溶解氧 來(lái)衡定。依據(jù)具 體的發(fā)酵類型和工藝條件而定。 第二章 種子制備 生化工藝 66 種齡 ：種子培養(yǎng)時(shí)間。 第二章 種子制備 生化工藝 60 二、種子擴(kuò)大培養(yǎng)的任務(wù)和培養(yǎng)類型 ： 獲得 大量 的 活力強(qiáng) 的種子，以便在發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中盡可能地縮短遲滯期。 生理性狀穩(wěn)定 ，如菌絲形態(tài)、菌絲生長(zhǎng)速率等符合要求。 ? 自發(fā)突變率 加速退化的因素 ? 傳代次數(shù)過(guò)多 ? 不適宜的培養(yǎng)條件 第二章 種子制備 生化工藝 51 （ 1） 控制傳代次數(shù) （ 2） 創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 ： 培養(yǎng)基 ； 培養(yǎng)溫度等 （ 3） 利用不易衰退的細(xì)胞傳代 ： 霉菌 、 放線菌 ： 無(wú)性孢子或有性孢子 （ 4） 采用有效的菌種保藏方法 第二章 種子制備 生化工藝 52 菌種合理傳代方法之一 第二章 種子制備 生化工藝 53 4 菌種的復(fù)壯 rejuvenation 狹義復(fù)壯 在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過(guò)純種分離和測(cè)定典型性狀、生產(chǎn)性能等指標(biāo)，從已衰退的群體中篩選出少數(shù)尚未退化的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)原菌株固有性狀的相應(yīng)措施。 進(jìn)一步研究該基因的結(jié)構(gòu) 、 功能 ， 或表達(dá)該基因的產(chǎn)物 。 載體必須具有自我復(fù)制的能力 ， 一般可利用質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化作用或噬菌體的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 ， 將供體基因帶入受體細(xì)胞內(nèi) 。 第二章 種子制備 生化工藝 37 ⑶ 體外重組 將上述分別處理過(guò)的目的基因和細(xì)菌質(zhì)粒 DNA片段（或噬菌體核酸）放在試管中，在較低溫度（ 5～ 6℃ ）下混合 “ 退火 ” 。 第二章 種子制備 生化工藝 35 第二章 種子制備 生化工藝 36 操作要點(diǎn) ⑴ 提取目的基因 用密度梯度離心方法分別從供體細(xì)胞中提取所需要的 DNA即目的基因和作為載體的細(xì)菌質(zhì)?；蚴删w核酸 ，目的基因也可通過(guò)化學(xué)方法人工合成 。由于紫外線穿透力不強(qiáng)，要求照射液不要太深，約～ ，同時(shí)要用電磁攪拌器或手工進(jìn)行攪拌，使照射均勻。 在以后的復(fù)篩階段 ， 還應(yīng)不斷結(jié)合自然分離 ，純化菌株 。 初篩以迅速篩出大量的達(dá)到初步要求的分離菌落為目的 ，以量為主 。 誘變育種與其他育種方法相比 ，具有操作簡(jiǎn)便 、 速度快和收效大的優(yōu)點(diǎn) ， 至今仍是一種重要的 、 廣泛應(yīng)用的微生物育種方法 。因此，微生物具有巨大的潛力可挖掘。 ?2．理解菌種的選育方法，如誘變育種，抗噬菌體菌株的選育，雜交育種，原生質(zhì)體融合技術(shù)。 第二章 種子制備 生化工藝 3 能力目標(biāo) ?，包括實(shí)驗(yàn)室種子制備，生產(chǎn)車間種子制備，基因重組微生物種子培養(yǎng)。 第二章 種子制備 生化工藝 7 大腸桿菌 應(yīng)用：生產(chǎn)天冬氨酸、蘇氨酸、纈氨酸。 第二章 種子制備 生化工藝 27 誘變的基本原理 誘變劑 物理誘變劑 紫外線 、 X— 射線 、 γ — 射線 ， 快中子 化學(xué)誘變劑 亞硝酸 、 烷化劑 生物誘變劑 噬菌體 誘變機(jī)理 ①物理誘變劑 紫外線：形成胸腺嘧啶二聚體 ②化學(xué)誘變劑 堿基突變、染色體畸變 第二章 種子制備 生化工藝 28 ? 誘變育種步驟 ? 出發(fā)菌株的選擇 ? 處理菌懸液的制備 ? 誘變處理 ? 中間培養(yǎng) ? 分離和篩選 關(guān)鍵是制備單細(xì)胞和單孢子狀態(tài)的、活力類似的菌懸液 第二章 種子制備 生化工藝 29 確定出發(fā)菌株 ↓ 菌種的純化選優(yōu) ↓← 出發(fā)菌株的性能鑒定 同步培養(yǎng) ↓ 制備單細(xì)胞（或單孢子）懸液 ↓← 活菌濃度測(cè)定 誘變劑的選擇與確定誘變劑量的預(yù)試驗(yàn) ↓ 誘變處理 ↓ 平板分離 ↓ 計(jì)形態(tài)變異的菌落數(shù)，計(jì)算突變率 挑取疑似突變菌落純培養(yǎng) ↓ 突變體的初
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