章12節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)與功能-wenkub.com
2025-04-30 08:30 本頁面
【正文】 用于估計 DNA間的同源性，進化相關(guān)性，DNA限制性片段等。復(fù)性后物化性質(zhì)恢復(fù) DNA變性后 驟然冷 至低溫時，不能復(fù)性。 介質(zhì)中的 離子強度 ：離子強度較低的介質(zhì)中， DNA的熔解溫度較低，離子強度較高的介質(zhì)中， DNA的 Tm值較高，且發(fā)生熔解的溫度范圍較小。 DNA分子有紫外吸收是因為嘧啶、嘌呤堿基；變性時 DNA雙螺旋內(nèi)的堿基充分暴露，提高了吸光值。 六、核酸的變性、復(fù)性和雜交 （一） 變性 ：對 DNA加熱時， DNA雙鍵之間的氫鍵斷裂的過程，稱 DNA的 變性 或叫 DNA的 融解 。 ? 核酸變性時 e(p)值顯著升高 ， 稱 增色效應(yīng) ， ? 變性的核酸復(fù)性后 ， e(p)值又回復(fù)到原來水平 ， 稱 減色效應(yīng) 。 RNA只有局部雙螺旋 ， 浮密度比雙鏈 DNA高 ， 沉低；雙鏈 DNA高于蛋白質(zhì)的浮密度 ， 居中 ， 據(jù)此可用超速離心分離 。 超螺旋的分離和檢測： 1） 超速離心； 2） 瓊脂糖凝膠電泳 負超螺旋的形成： 將螺旋的方向定為向上 則向左轉(zhuǎn)形成 正 超螺旋 向右轉(zhuǎn)即 負 超螺旋 387 bp 3 kb M P R M: λDNA/HindIII+EcoR I P：重組質(zhì)粒 pBSK387bP R：重組質(zhì)粒 pBSK387bP用酶切割后 第二節(jié) DNA的理化性質(zhì) 差異很大，分子量 106109，真核常在 1010以上 SV40 3106 T2或 T4噬菌體 λ 噬菌體 大腸桿菌 DNA 流感嗜血桿菌 8108 小鼠線粒體 DNA 人第三對染色體 DNA的長度 納米 到 厘米 φx174 為 μm， 果蠅巨染色體為 μm 一 、 DNA的分子大小 二、核酸的粘度 DNA分子 具有很高的粘度。 Lk = Lko Relaxed closed circular Rejoin the DNA Lk = Lko – 4 ?Lk = 4 Break the circular DNA Untwist 4 x 360o twist 4 x 360o Lk = Lko + 4 ?Lk = + 4 DNA isolated from cell negatively supercoiled by ~ 6 turns per 100 turns of the helix. ?Lk / Lk = Negatively supercoiled positively supercoiled 溴乙錠、放線菌素 D等分子扁平狀，可嵌入 DNA堿基間，使相鄰堿基對間隔增加（ ），超螺旋解旋，盤繞數(shù)減少，超螺旋向相反方向（右）旋轉(zhuǎn)，為負超螺旋。 即在一個 假想軸 的兩側(cè)，堿基序列之間有倒轉(zhuǎn)重復(fù)關(guān)系， DNA變性后，倒轉(zhuǎn)重復(fù)序列之間可以形成 十字形結(jié)構(gòu) 或 發(fā)夾結(jié)構(gòu) 。 其功能不完全清楚 。 (每個二聚體 ) 堿基對旋轉(zhuǎn)上升高度 螺距 堿基對與中心軸傾角 20176。 在實驗室中 ， 由不少于 6bp的交替嘌呤 嘧啶序列形成；ZDNA可能存在于基因表達的調(diào)控有關(guān)區(qū) 。 體內(nèi) DNARNA、 RNARNA雙螺旋是 A型 ，這種現(xiàn)象稱為 DNA結(jié)構(gòu)的多態(tài)性（ polymorphism） ， BDNA是基本構(gòu)象，最穩(wěn)定。 雙螺旋中， A與 T配對二個氫鍵， G與 C配對三個氫鍵 5 、相鄰的二個堿基對不在同一位置（由于脫氧核糖中連接堿基的 C并不正好處在螺旋的相對位置上），使二條鏈與中心軸的間距不同，在 DNA雙螺旋的表面形成大溝和小溝，酶等大分子自大溝進入，進行復(fù)制，調(diào)控等 DNA double helix Two separate strands Antiparellel (5’?3’ direction) Complementary (sequence) Base pairing: hydrogen bonding that holds two strands together Essential for replicating DNA and transcribing RNA ? Sugarphosphate backbones (negatively charged): outside ? Planar bases (stack one above
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