毛細管電泳課件(2)-wenkub.com
2025-04-28 02:52 本頁面
【正文】 在毛細管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以含有機物的緩沖液為流動相，以電滲流為驅(qū)動力，試樣組分在兩相間的分配為分離機理的電動色譜過程； 六、毛細管電色譜 Capillary electroosmostic chromatography， CEC 一、離子分析 陽離子分析 遷移方向和電滲流方向一致； min內(nèi)分離了 24種金屬離子； 陽極進樣，陰極檢測； 具有很高的靈敏度。陰極進樣，陽極檢測。在其等電點時，呈電中性，淌度為零； 四、毛細管等電聚焦 Capillary isoelectric focusing, CIEF ：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達滿足其等電點 pH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離； ，陰極端裝稀 NaOH溶液； ； CIEF中不利，應消除或減小。 ，其濃度達到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負電的膠束。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。= πf（進樣量第四節(jié) 毛細管電泳類型 常用的六種電泳分離模式； 根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型； 每種機理的選擇性不同； 一、毛細管區(qū)帶電泳 （ Capillary zone electrophoresis , CZE） 帶電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和。 毛細管內(nèi)徑一般為 20～ 100 μm。 細內(nèi)徑毛細管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機會。 2. 進樣的影響 當進樣塞長度太大時，引起的峰展寬大于縱向擴散。 Vap是表觀遷移速度； μ ap是表觀淌度； ldet 是毛細管有效長度； ltot 是毛細管總長度 （塔板數(shù)） 在 CE中，僅存在縱向擴散， σ 2=2Dt 擴散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴散系數(shù)大的分離效率高，這是分離生物大分子的依據(jù)。 ?加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向； ?加入不同陽離子表面活性劑來控制電滲流。 ② 陰離子的影響 在其它條件相同，緩沖液濃度相同而陰離子不同時，毛細管中的電流有較大差別，產(chǎn)生的電滲流不同。 （ 3）電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響 ① 溶液 pH的影響 對于石英毛細管，溶液 pH增高時，表面電離多，電荷密度增加，管壁 zeta電勢增大，電滲流增大。 ? 電滲流的速度一般約等于離子電泳速度的 5～ 7倍； ? 各種電性粒子在毛細管柱中的遷移速度為： ? 陽離子遷移速度 =電滲流 +電泳流，陽離子運動速度快于電滲流； ? 陰離子遷移速度 =電滲流 –電泳流，陰離子運動速度慢于電滲流； ? 中性粒子遷移速度 =電滲流，中性粒子運動速度與電滲流一致。 ? 在具體實驗中 ，可根據(jù)需要選用不同的中性組分作為標記物（ N,N二甲基甲酰胺、二甲亞砜、甲酰胺、苯酚、丙酮等 ），測定不同緩沖條件下中性標記物的遷移時間，按下述公式計算出電滲率： 其中， t：中性標記物的遷移時間， ldet為毛細管電泳有效長度， ltot為毛細管電泳有效長度。 ?? rqef π6E????rqEefef π6??μ二、電滲流 ? 在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴散層向陰極移動，由于這些 陽離子實際上是溶劑化的 ，故將引起柱中的溶液整體向負極移動，形成電滲流。 對于 球形分子 F’的大小服從 Stokes定律： F’=6πηrνef η：緩沖液粘度； r：球形分子的半徑； νef：離子在電場中的遷移速度。 ?有效電泳淌度 ：在實際溶液中測得的淌度。 二、毛細管電泳的特
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