線粒體相關(guān)研究ppt課件-wenkub.com
2025-01-12 07:39 本頁(yè)面
【正文】 ?單克隆抗體技術(shù) ?正常淋巴細(xì)胞 （ 如小鼠脾細(xì)胞 ） 具有分泌抗體的能力 ， 但不能長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 瘤細(xì)胞 （ 如骨髓瘤 ） 可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 但不分泌抗體 。 ? 異核體： 不同基因型的細(xì)胞融合而成 。 3. 原生質(zhì)體培養(yǎng) ：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)： – ①比較容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)，如 DNA； – ②便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞； – ③適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。 指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群 。 ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） ：即：培養(yǎng)直接來(lái)自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群 ， 將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱為傳代或 傳代培養(yǎng) （ Passage） 。 ? 各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同 ，故在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同 。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 二、流式細(xì)胞術(shù) ? 用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行 快速定量分析與分選 的一門(mén)技術(shù) 。 isopyic sedimentation ? 用途：分離密度不等的顆粒 。 ? 分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求： – 1） 能產(chǎn)生密度梯度 ， 且密度高時(shí) ， 粘度不高； – 2） PH中性或易調(diào)為中性； – 3） 濃度大時(shí)滲透壓不大； – 4） 對(duì)細(xì)胞無(wú)毒 。 ? 可將細(xì)胞器初步分離 ， 常需進(jìn)一步通過(guò)密度梯離心再行分離純化 。 ? 目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá) 100000r/min， 離心力超過(guò) 500Kg。 ? 反應(yīng)過(guò)程：①變性：約 9095℃ ；②復(fù)性：約 60℃ 左右；③延伸： 7075℃ ；④重復(fù) “變性 ——復(fù)性 ——延伸” 過(guò)程 2030次循環(huán)。 ? 將 RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上 ， 用探針雜交 ， 則稱為Northern雜交 。 ? （ 一 ） 原位雜交 （ in situ hybridization） 。 常用 3HTDR來(lái)顯示 DNA， 用 3HUDR顯示 RNA；用 3H氨基酸研究蛋白質(zhì) ， 用 3H甘露糖 、3H巖藻糖研究多糖 。 ? 可利用顯微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測(cè)定。 常用的標(biāo)記物有熒光素和酶 。 產(chǎn)生新生氧 ， 后者再將無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán) ， 進(jìn)而變成棕色化合物 。 （二）顯示方法 1. 金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后 ， 反應(yīng)產(chǎn)物最終生成 CoS或 PbS有色沉淀 ， 而顯示出酶活性 。 顯微操作儀 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) 一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù) ? 組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method） 用于對(duì)某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究 。 顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置 。 電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系 ， 將掃描過(guò)程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像 ， 即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài) 。 ? 分辨力為 6~10nm， 由于人眼的分辨力 （ 區(qū)別熒光屏上距離最近兩個(gè)光點(diǎn)的能力 ） 為 ， 掃描電鏡的有效放大倍率為 。 然后斷開(kāi) ， 升溫后 ， 冰升華 ，暴露出了斷面結(jié)構(gòu) 。 ? 通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級(jí)脫水，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。 ? 由電子照明系統(tǒng) 、 電磁透鏡成像系統(tǒng) 、 真空系統(tǒng) 、 記錄系統(tǒng) 、 電源系統(tǒng)等 5部分構(gòu)成 。 （九）當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢(shì) ? 采用組合方式 ， 集普通光鏡加相差 、熒光 、 暗視野 、DIC、 攝影裝置于一體 。 ? 載物臺(tái)是可以旋轉(zhuǎn) 。 1. 環(huán)形光闌 （ annular diaphragm） ：位于光源與聚光器之間 。 laser confocal scanning microscope, LCSM LCSM Image of a Xenopus Mela
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