【正文】 ? 特點： – 介質密度較高 ， 陡度大 ， 介質的最高密度應大于被分離組分的最大密度 。 PCR原理 第三節(jié) 細胞分離技術 一、離心技術 ? 是分離細胞器 （ 如細胞核 、 線粒體 、 高爾基體 ） 及各種大分子基本手段 。 四、放射自顯影術 ? 用于研究標記化合物在機體 、 組織和細胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機理 、 作用部位等等 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑 。 淀粉 （七）微分干涉差顯微鏡 Differential interference contrast microscope （ DIC） ? 1952年 ， Nomarski發(fā)明 ， 利用兩組平面偏振光的干涉 ，加強影像的明暗效果 ， 能顯示結構的三維立體投影 。 （二）熒光顯微鏡 Fluorescence microscope ? 特點：光源為紫外線 ， 波長較短 ， 分辨力高于普通顯微鏡； ? 有兩個特殊的濾光片； ? 照明方式通常為落射式 。 – 普通光線的波長為 400~700nm，分辨力數值不會小于，人眼的分辨力為 ,因此顯微鏡的最大設計倍數為 1000X。 ? 載物臺是可以旋轉 。 然后斷開 ， 升溫后 ， 冰升華 ，暴露出了斷面結構 。 顯微操作儀 第二節(jié) 生物化學與分子生物學技術 一、細胞化學技術 ? 組織化學和細胞化學染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method） 用于對某些細胞成分進行定性和定位研究 。 ? 可利用顯微分光光度計對某些成分進行定位、定性和定量測定。 ? 反應過程：①變性：約 9095℃ ；②復性：約 60℃ 左右；③延伸： 7075℃ ；④重復 “變性 ——復性 ——延伸” 過程 2030次循環(huán)。 isopyic sedimentation ? 用途：分離密度不等的顆粒 。 指由同一個祖先細胞通過有絲分裂產生的遺傳性狀一致的細胞群 。 ?單克隆抗體技術 ?正常淋巴細胞 （ 如小鼠脾細胞 ） 具有分泌抗體的能力 ， 但不能長期培養(yǎng) ， 瘤細胞 （ 如骨髓瘤 ） 可以在體外長期培養(yǎng) ， 但不分泌抗體 。 ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） ：即：培養(yǎng)直接來自動物機體的細胞群 ， 將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或 傳代培養(yǎng) （ Passage） 。 ? 分離活細胞的介質要求： – 1） 能產生密度梯度 ， 且密度高時 ， 粘度不高； – 2） PH中性或易調為中性； – 3） 濃度大時滲透壓不大； – 4） 對細胞無毒 。 ? 將 RNA轉移到薄膜上 ， 用探針雜交 ， 則稱為Northern雜交 。 常用的標記物有熒光素和酶 。 顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內移動的機械裝置 。 ? 通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。 1. 環(huán)形光闌 （ annular diaphragm） ：位于光源與聚光器之間 。 （一）普通光學顯微鏡 ? 3. 分辨力：指分辨物體最小間隔的能力 。 ? 能顯示細胞樣品的立體結構。 ? 自動化與電子化 。 （二）掃描電子顯微鏡 Scanning electron microscope（ SEM） ? 工作原理：是用一束極細的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結構有關，次級電子由探測器收集，信號經放大用來調制熒光屏上電子束的強度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。 2. Schiff反應：細胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 （一）差速離心 Differential cen